新城疫疫苗接种孔雀后抗体水平的检测

摘　要：为了解孔雀使用新城疫疫苗免疫后的效果，分别于免疫前和免疫后15、30、60、90d采血进行血凝抑制试验(HI)，对孔雀体内的抗新城疫病毒抗体进行检测。结果显示，孔雀接种新城疫疫苗后15d平均HI抗体水平达到高峰，并可持续到免疫接种后30 d，免疫接种后90 d，抗体平均滴度已经和免疫前的抗体水平基本持平。

关键词：孔雀；新城疫；血凝抑制试验；抗体；检测

新城疫病毒(Newcastle diseasevirus，NDV)属于副黏病毒科禽病毒属，除了鸡、火鸡以及野鸭易感以外，其他多种鸟类如鸽子、鹌鹑、麻雀、猫头鹰、鹦鹉等都有发生新城疫的报道。自2002年以来，全国各地有关孔雀发生新城疫的病例报道已将近20起^[1­4]。近来南宁市某孔雀养殖场饲养的孔雀突然出现精神不振、食欲减退、嗜睡、饮水量增加、排黄绿色稀粪等临床症状，有的出现神经症状，头颈伸向腹部或向后仰，最后抽搐死亡，经实验室诊断为新城疫病毒感染。该场饲养的孔雀使用新城疫活疫苗进行春秋两季免疫接种，但仍然发生了新城疫。为此，我们采用血凝抑制试验(HI)对该群孔雀的新城疫抗体水平进行了检测，以了解该养殖场饲养的孔雀对新城疫的免疫状况，为今后制定合理的免疫程序提供理论依据。

1　材料与方法

1.1　材料

新城疫C30疫苗(购自广西生物制品厂)；5 mL/L红细胞悬液，按文献[5]配制；V型96孔微量滴定板为北京欣经科生物公司生产，9g/L灭菌生理盐水，临用时配制；微量加样器，MM­1微型混合器为江苏省南通电子分析仪器厂生产。

1.2　方法

挑选成年孔雀20只，分别于免疫前和免疫后15、30、60、90 d按常规方法翅静脉采血，加入到1.5mL小离心管中，待血液充分凝集后，于4 ℃以12 000 r/min离心10 min分离制备血清，置－20℃保存备用。待不同日龄的所有血清样品都采集完后，测定其NDV的HI抗体滴度。

血球凝集试验(HA)和血球凝集抑制试验(HI)按文献[5]进行。

HI抗体平均效价的计算：

HI抗体平均效价(log2)＝∑xn/∑n (x表示HI抗体效价，n表示该效价的血清份数)

2　结果

对接种前采集的孔雀血清样品进行检测，结果如表1所示。20份血清中有3份已经检测不到HI抗体，20份血清HI抗体的平均滴度为3.1。分别于孔雀接种新城疫疫苗后15、30、60d和90d采集血清进行HI抗体的检测，结果见表1。为了更直观地显示免疫后抗体滴度随时间变化的趋势，以免疫接种后的天数为横坐标，抗体平均滴度(log2)为纵坐标绘制了图1。由表1和图1可以看出，孔雀接种新城疫疫苗后15d，平均HI抗体水平达到高峰(7.1 log2)，并可持续到免疫后30 d，然后抗体水平开始下降。免疫接种后90d，抗体平均滴度已经下降到3.3 log2，这和免疫前的抗体水平基本持平。

表1　孔雀新城疫HI抗体检测结果

Table 1　HI antibody titers of NDV in peafowl

图1　接种新城疫疫苗后孔雀体内HI抗体滴度的动态变化

Fig.1　The dynamic alteration of HI antibody titer after vaccinationwith ND vaccine

3　讨论

3.1　该孔雀养殖场近年来一直使用ND三价活疫苗进行春秋两季免疫来预防新城疫，但最近却发生了新城疫。该群孔雀此次免疫距上次免疫大约有4个半月，由免疫前的抗体水平可以看出，有60%(12/20)的孔雀其HI抗体滴度在4log2以下，其中有3只孔雀(占15%)血清中已经检测不到HI抗体，检测的20只孔雀的HI抗体的平均滴度为3.1log2，说明此时HI抗体滴度已经很低。有报道称，鸡体内HI抗体的滴度如果低于4log2以下就不能有效抵御新城疫野毒的侵袭。孔雀抵抗新城疫野毒感染的HI抗体滴度的临界值有待进一步的确定。另外，该群孔雀在免疫前的HI抗体水平的分布很不均匀，参差不齐，说明上一次的免疫效果不理想。

3.2　接种新城疫疫苗后HI抗体获得提高，2个月后的HI抗体平均滴度为4.4 log2，但3个月后则降为了3.3log2，根据该场已经发生孔雀新城疫的情况，表明此时的抗体水平已经不能提供有效的保护。根据试验结果，建议在没有更换疫苗的情况下增加免疫次数。

3.3　自陈嘉章1994年报道了孔雀新城疫的病例以来^[6]，迄今为止已有超过29起孔雀新城疫的病例报道，仅2002年以来，全国各地孔雀发生新城疫的病例报道就将近20起。然而，有关孔雀新城疫的免疫保护研究和分子流行病学研究都未见有报道，今后应加强这方面的研究，为孔雀新城疫的防治提供理论依据。