摘 要：在饲喂基础日粮的基础上，在肉用仔鸡饮用水中添加0、1.25%、2.5%和5%的杜仲提取物，通过观察1、2、3、4、5、6周肉仔鸡法氏囊、胸腺和脾脏发育的组织学情况，来研究杜仲的生物学功能，旨在为杜仲提取物作为饲料添加剂提供理论依据。结果表明，添加2.5%、5%杜仲提取物试验组中胸腺小叶、脾小结和法氏囊小结发育程度与对照组相比均发生显著性变化，因而从组织学角度进一步表明了杜仲能够不同程度地促进免疫器官的发育，增强机体的免疫应答能力，从而提高了机体的抵抗力。
关键词：杜仲；免疫器官；组织学；肉仔鸡
两千多年来，杜仲(Eucommia ulmoidesOliv)一直是我国传统医药推崇的常用中药之一。自从20世纪80年代中国科学院化学研究所严瑞芳等在国际上首次成功地将杜仲胶硫化成高弹性橡胶后，便带来了杜仲的三级开发[13]。首先是利用杜仲叶生产杜仲粉用于加工保健品，如福建农业大学生产的乌龙保健茶、贵阳老来福公司研制的杜仲冲剂等一系列杜仲保健食品等；其次利用杜仲渣提取杜仲胶，使杜仲胶的研究迈入“杜仲材料工程学”的新阶段；最后是利用杜仲渣生产装饰材料[15]。由于杜仲的用途广泛，早已被日本、前苏联等引进并大量种植和开发研究，其中以日本、韩国和前苏联的研究和应用水平最具代表性[510]。日本历来对杜仲的研究开发工作非常重视，1993年以来便集中研究杜仲的药效药理，目前已经测定了杜仲的营养成分，并进入按成分含量多少进行排序与单一成分的分离及各成分的生理活性的分析研究阶段；前苏联和韩国也开展了一系列的研究，并取得了较好的研究进展。
杜仲是杜仲科、杜仲属的多年生落叶乔木植物，经中外医药学研究证实，杜仲叶、皮均含氯原酸、环烯醚萜类、木脂素等药理成分。杜仲具有补肝肾、强筋骨、抗老防衰、抗菌消炎、免疫调节和双向调节人体血压、消除血液循环障碍等功效[15]。因此，本试验通过在肉仔鸡的饮水中添加不同浓度的杜仲提取物，通过组织学观察探讨其对肉仔鸡免疫器官生长
发育的影响进行杜仲生物学功能的研究，旨在为促进杜仲在畜牧业生产中的广泛应用提供理论指导。
1 材料与方法
1.1 试验材料
杜仲购自江苏省药材公司，杜仲提取物的制备方法是称取杜仲，用水清洗，倒入不锈钢锅中浸泡30min，加水没过药面，水煎3次，过滤，浓缩，离心，取上清液稀释成规定浓度，装瓶，消毒备用。
1.2 疫苗
鸡新城疫Ⅳ系活疫苗由中牧实业股份有限公司南京药械厂生产(批号：040208)；传染性法氏囊病油乳灭活苗由青岛易邦生物工程有限公司生产(批号：2005041)。
1.3 试验鸡
400羽健康1日龄AA商品肉鸡，随机分成对照组(0)、试验组Ⅰ(1.25%)、试验组Ⅱ(2.5%)和试验组Ⅲ(5%)，每组两个重复(公母各半)，立体笼养。饲养管理规范化，自由采食和饮水。7日龄时，各组鸡均用鸡新城疫苗按照说明滴鼻滴眼，传染性法氏囊病油乳灭活苗颈部皮下注射(0.3mL/只)。
1.4 试验设计
将杜仲水煎剂配成1.25%、2.5%和5%3个剂量，分别添加到试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的饮水器中，对照组为自来水，试验组均连续处理6周，分别在添加后1、2、3、4、5、6周从各组中随机抽取5只屠宰，解剖后分别取法氏囊、胸腺、脾脏等组织固定，用组织学方法研究免疫器官等组织的发育变化情况[11]。
1.5 组织切片的制作与观察
鸡只解剖后即刻进行采样，随即将组织样置于10%的中性福尔马林溶液中固定48 h后进行常规组织学切片制作[11]。光镜下对组织切片进行观察与拍照。
2 结果
2.1 杜仲提取物对法氏囊早期发育的影响
对照组法氏囊小结在第1周和第2周时比较小，皮质较薄，小结内淋巴细胞数量少、细胞排列疏松，小结间结缔组织较少(图1A)；随着周龄的增加，法氏囊小结增大，体积也有不同程度的增大，皮质变厚，法氏囊小结内淋巴小结数量较多，小结间结缔组织增多；与对照组相比，试验组法氏囊发育较快(图1B和图1C)。
2.2 杜仲提取物对胸腺早期发育的影响
对照组胸腺小叶在第1周和第2周时体积小、皮质薄，小叶内淋巴细胞排列疏松，含有少量胸腺小体；第5周龄和第6周龄时胸腺小叶体积增大、增厚，皮质内淋巴细胞增多，淋巴细胞排列紧密，胸腺小体也有所增加；与对照组相比，试验组发育较快，在相同日龄时试验组胸腺小叶体积明显变大，皮质明显增厚。
2.3 杜仲提取物对脾脏早期发育的影响
对照组脾脏在第1周和第2周时体积小，脾小结数量少，动脉周围淋巴鞘较薄，淋巴细胞排列疏松，红髓比例较大，脾索和脾窦不明显，很少能观察到生发中心；随着日龄的增加，脾小结数量增加，体积增大，动脉周围淋巴鞘增厚，淋巴细胞多且排列紧密，白髓占的比例增大，能见到少量的生发中心(图1D和图1F)；与对照组相比，试验组脾脏发育较快(图1E和图1G)。
A.第1周龄时对照组法氏囊；B.第1周龄时试验Ⅱ组法氏囊；C.第1周龄时试验Ⅲ组法氏囊；D.第3周龄时对照组脾小结；E.第3周龄时试验Ⅱ组脾小结；F.第3周龄时对照组脾动脉淋巴鞘；G.第3周龄时试验Ⅱ组脾动脉淋巴鞘；标尺为50微米
A.Fabricius bursa in control at week 1；B.Fabricius bursa in Group Ⅱat week 1；C.Fabricius bursa in Group Ⅲ at week 1；D.Spleen mass incontrol at week 3；E.Spleen mass in Group Ⅱ at week 3；F.Spleenartery lymph theca in control at week 3；G.Spleen artery lymph thecain Group Ⅱ at week 3.Bar＝50 μm
图1 杜仲对肉仔鸡免疫器官生长发育的影响
Fig.1 Effects of Eucommia bark on the development of immune organsof broilers
3 讨论
本研究表明杜仲可以显著促进肉仔鸡免疫器官的发育，从而增强机体的免疫功能与抵抗力。
家禽的免疫系统既具有动物的免疫系统的共性，又在其免疫系统的结构及功能方面形成了许多特殊性，具有相对的独立性及完整性[1215]。其中最重要的免疫器官是胸腺、法氏囊和脾脏。胸腺和法氏囊是机体的中枢免疫器官，二者均属淋巴样上皮结构；脾脏属于外周免疫器官。法氏囊是抗体生成系统的细胞生长和分化的部位，能产生大量的浆细胞和各种特异性的B细胞(囊依赖淋巴细胞)，参与体液免疫反应。胸腺主要是产生与细胞免疫活动有关的T细胞，这些细胞可以转移到脾、盲肠、扁桃体和其它淋巴组织中，在特定的区域定居、繁殖，并参与细胞的免疫活动[1215]。成年家禽脾脏主要有造血功能，在胚胎时期的主要功能是生成红细胞；脾脏的过滤功能是通过充满网状细胞和巨噬细胞的巨大网状纤维网来完成的，它不但可以清除衰老死亡的红细胞，还能清除血流中的大部分抗原，参与细胞免疫应答。如果切除脾脏，机体产生抗体的能力显著降低[1215]。本试验结果表明杜仲可以显著促进这些免疫器官的发育，从而增强机体的抵抗力和免疫功能。这可能与杜仲皮、叶和果中含有丰富的营养元素和抗生物质有关，具体的机制将有待于进一步的研究分析。
综上所述，利用杜仲作为饲料添加剂，不但进一步证明了其可以显著促进家禽免疫器官的早期发育来提高机体的抵抗力和免疫功能，而且也进一步表明由杜仲开发的绿色食品具有保健功能，同时也表明其将是未来畜牧业生产中不可缺少的重要绿色饲料添加剂之一。