盐酸环丙沙星注射液的高效液相色谱测定

摘　要：建立测定盐酸环丙沙星注射液中盐酸环丙沙星含量的高效液相色谱检测方法。色谱柱为Gemini C18110A( 250mm×4.60 mm,5 μm)，流动相为0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺调pH至3.0±0.1)-乙腈(75∶25)，检测波长277 nm，流速1.0 mL/min，进样量10μL。在12.5 μg/mL～200 μg/mL浓度范围内，盐酸环丙沙星的峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.9994(n＝5)，平均回收率为99.58%。该方法简便、准确、灵敏，可用于测定盐酸环丙沙星注射液的含量。

关键词：盐酸环丙沙星；注射液；高效液相色谱法；含量测定

盐酸环丙沙星属于氟喹诺酮类广谱抗菌药，在兽医临床上，用于敏感细菌和支原体所致家畜、禽类及小动物的各种感染性疾病。此药具有抗菌谱广、抗菌活性强、吸收良好、体内分布广泛、抗菌作用独特、无交叉耐药性等特点^[1-2]，医学上已广泛应用^[3-5]。盐酸环丙沙星注射液在《兽药质量标准》2003年版已有收载，该标准采用紫外分光光度法测定含量^[6]。此法专属性不强，准确性不及高效液相色谱法，作为生产过程中中间产品的质量控制方法较适合。笔者采用高效液相色谱法测定盐酸环丙沙星注射液的含量^[6-10]，经与紫外分光光度法^[11]比较^[12-13]，结果基本一致，而且准确性高，专属性和可信度强。

1材料与方法

1.1材料

Agilent 1200型高效液相色谱仪，CP225D型电子天平，UV-2450型紫外可见分光光度计，pHS-3C型精密pH计。

盐酸环丙沙星对照品，批号为H010105，含量100.0%，中国兽医药品监察所生产；盐酸环丙沙星(原料)，批号为HB070945，浙江新华制药有限公司生产；盐酸环丙沙星注射液，规格为10mL含0.2g，批号为20080601,20080602,20080603，广东大华农动物保健品股份有限公司生产；磷酸、盐酸、三乙胺为分析纯；乙腈为色谱纯。

1.2方法

1.2.1试剂的配备

1.2.1.1盐酸溶液(0.1 mol/L)取盐酸9 mL，加水至1 000 mL，摇匀，备用。

1.2.1.2磷酸溶液(0.025 mol/L)取磷酸1.71 mL，加水至1 000 mL，摇匀，备用。

1.2.2色谱条件　色谱柱：填料Gemini 5 μm C18110A，尺寸：250 mm×4.60 mm 5micron；流动相：0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺调pH至3.0±0.1)-乙腈(75∶25)；检测波长277nm；流速1.0 mL/min；进样量10 μL。

1.2.3绘制标准曲线　取盐酸环丙沙星对照品0.012 5、0.025、0.05、0.1、0.2 g精密称量，分别置100mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；各精密量取5 mL，置50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成浓度分别为12.5、25、50、100、200 μg/mL的标准溶液，参照高效液相色谱法^[14]测定。

1.2.4系统适用性　精密量取盐酸环丙沙星注射液(批号20080601)5 mL，按1.2.3方法稀释并测定。

1.2.5稳定性试验　精密量取盐酸环丙沙星注射液(批号20080601)5 mL，置100mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；精密量取5 mL，置50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，放置0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h，按1.2.3方法测定。

1.2.6空白试验　按处方比例称取辅料适量，制备不含盐酸环丙沙星的空白样品，按1.2.3方法测定。

1.2.7回收试验　取在105 ℃干燥至恒重的盐酸环丙沙星对照品50、100、200 mg各3份，精密称量，分别置于100mL容量瓶中，按处方量加入其他辅料，加溶剂溶解，摇匀，制成小样，分别精密量取5 mL，置50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；按1.2.3方法测定峰面积。

1.2.8精密度试验　取在105 ℃干燥至恒重的盐酸环丙沙星原料药(批号HB070945)3份，各约100mg，精密称量，分别置100 mL容量瓶中，按处方量加入其他辅料，加溶剂溶解，摇匀，制成3份注射液小样，分别精密量取5 mL，置50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为测定盐酸环丙沙星注射液精密度试验用溶液，另取盐酸环丙沙星对照品适量，按1.2.3项下方法测定，按外标法以峰面积计算。

1.2.9高效液相色谱法与紫外分光光度法测定　盐酸环丙沙星注射液含量的比较。

1.2.9.1高效液相色谱法　取批号为20080601、20080602、20080603的盐酸环丙沙星注射液，精密量取5mL，按1.2.3方法稀释并测定，记录色谱图。另取盐酸环丙沙星对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算含量。

1.2.9.2紫外分光光度法　参照文献[6]，取批号20080601,20080602,20080603的盐酸环丙沙星注射液，精密量取5mL，分别置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，按照紫外分光光度法，在277nm波长处测定吸光度，按环丙沙星(C17H18FN3O3)的吸收系数为1 266.1计算出含量。

1.2.9.3紫外分光光度法　参照文献[13]，取批号20080601,20080602,20080603的盐酸环丙沙星注射液，精密量取5mL，分别置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。另取盐酸环丙沙星对照品适量，照紫外分光光度法，在277 nm波长处测定吸光度，并计算出含量^[13]。

2结果

2.1标准曲线

结果见表1。以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标进行线性回归，得到标准曲线方程：A＝63.765C＋134.15(r＝0.9994，n＝5，C的单位为μg/mL)。结果表明，在12.5 μg/mL～200μg/mL的浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系(图1)。

表1标准溶液的峰面积

Table 1The peak-area of standard solution

图1盐酸环丙沙星标准曲线

Fig.1The standard curve ofciprofloxacin hydrochloride

2.2系统适用性结果

连续进样6次，所得峰面积的RSD为0.14%。按盐酸环丙沙星峰计算，理论板数为10 922，保留时间约为3.5 min。

2.3稳定性试验结果

从表2可见，盐酸环丙沙星注射液在2.5 h内峰面积基本保持不变，稳定性良好。

表2盐酸环丙沙星注射液的稳定性试验结果

Table 2The stabilitytest of ciprofloxacin hydrochloride injection

结果无吸收，不干扰测定，符合要求。

2.5回收试验结果

按下式计算含量，并求出回收率，平均回收率为99.58%，RSD为0.38%，结果见表3。

式中A为测得的峰面积，N为稀释倍数，V为量取样品的体积(mL)，P为样品规格(10 mL∶0.2g)；134.15为标准曲线的截距，15.68×10^－3为标准曲线斜率的倒数。

表3盐酸环丙沙星注射液回收率试验结果

Table 3The recovery rate of ciprofloxacin hydrochloride injection

2.6精密度试验结果

盐酸环丙沙星注射液含量的RSD为0.18%，结果见表4。结果表明，本法具有良好的精密度。

2.7几种测定方法结果的比较

结果见表5。

表4精密度试验结果

Table 4Precision test of ciprofloxacin hydrochloride injection

表5测得盐酸环丙沙星注射液中盐酸环丙沙星的含量

Table 5Determination of ciprofloxacin hydrochloride contentininjection

3讨论

用高效液相色谱法和紫外分光光度法分别测定盐酸环丙沙星注射液中盐酸环丙沙星含量，结果基本一致，说明高效液相色谱法可行。紫外分光光度法所用仪器较普遍，操作简便、快速，但专属性不强，准确性不及高效液相色谱法。笔者建议，兽药生产企业采用紫外分光光度法作为生产过程中中间产品的质量控制方法，国家标准改用高效液相色谱法测定兽用盐酸环丙沙星注射液成品中盐酸环丙沙星含量。