中药制剂对猪T淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率的影响

摘　要：将60头体重45kg左右的“杜长大”杂交猪随机分为3组。试验设3个处理：Ⅰ组(对照组)猪饲喂基础日粮；Ⅱ组猪饲喂基础日粮＋1%中药制剂；Ⅲ组猪饲喂基础日粮＋2%中药制剂，正试期60d。结果表明，与对照组相比，中药复方制剂可提高猪T淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率。中药复方添加剂能够增强猪细胞免疫水平，从而增强了猪的自身免疫力和抗病力。

关键词：中草药复方制剂；猪；T淋巴细胞转化率；白细胞吞噬率

抗生素饲料添加剂长期使用，造成耐药菌株大量产生，动物体内的药物残留量不断升高^[1-2]。许多新的疾病相继出现，成为危害人类健康的重大问题。为此，许多国家相继颁布法令，禁止或限制抗生素在饲料中的应用。现今世界各地都在呼吁食品安全，绿色消费成为时尚和生活必需^[2-3]。由于中药制剂富含多种活性成分，兼有药物和营养双重作用，可增强机体免疫力，提高动物生长速度，改善动物产品品质，因此，研制中药饲料添加剂具有重要意义^[3-4]。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试中药　供试中药购自亳州中药材市场。供试猪为安徽广德县安泰飞龙岗种猪场的“杜长大”三元杂交猪。试验基础日粮为生长猪饲料；中药试验组日粮为基础日粮的基础上添加复方中药制剂。

1.1.2仪器设备SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台为苏州净化设备有限公司产品。HH.CP-T型二氧化碳培养箱为上海福玛实验设备有限公司产品。YS2-H光学显微镜为日本Nikon公司产品。

1.1.3主要试剂PHA-M(植物血凝素)，购自Sigma公司。胎牛血清，购自杭州四季青生物工程材料有限公司。白色葡萄球菌为安徽农业大学动物科技学院实验室保存。

1.2试验方法

1. 2.1添加药材配方及加工过程　中药复方制剂为党参、炒白术、茯苓、炙甘草、黄芪各等份。在热风循环干燥箱(TG-Z-U型号)中以58℃烘干3 h，过100粉碎目筛，密封保存。

1. 2.2试验动物的选择分组及饲养管理　将60头、体重45kg左右的“杜长大”杂交猪随机分为3组，每组20头。试验设3个处理组：Ⅰ组(对照组)猪饲喂基础日粮；Ⅱ组猪饲喂基础日粮＋1%中药制剂；Ⅲ组猪饲喂基础日粮＋2%中药制剂。预试期7d，正试期60 d。试验猪采取群饲方式，自由采食和饮水。免疫消毒按猪场常规程序进行。

1.2.3测定指标及方法

1.2.3.1样品采集与制备

分别于试验的第0天、第30天和第60天早晨空腹用抗凝管站立式前腔静脉采血，4 ℃保存，24h内检测血液中的淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率。

1.2.3.2白细胞吞噬率的测定

(1)白色葡萄球菌菌液的制备　将白色葡萄球菌接种于肉汤培养基中，置37 ℃温箱中培养12 h。取出后将培养管置沸水中10min以杀死细菌，取无菌生理盐水稀释成6×10⁸个/mL，然后分装于无菌小瓶内，置冰箱保存备用。

(2)测定　用血红蛋白测定吸管吸取抗凝血0.06 mL，放入培养管中加入葡萄球菌菌液0.02mL，充分混匀。将玻片置于铺有湿布的有盖平皿内(此平皿先放在37 ℃温箱预温)，在37 ℃温箱中作用30 min，其间每隔10min摇匀1次。

作用完毕后，取一小滴于洁净玻片上，推成薄片，待干后用瑞-姬氏复合染色液染色，油镜观察。顺序计数200个细胞，分别记录吞噬和未吞噬的白细胞数。

1.2.3.3T淋巴细胞转化试验

(1)淋巴细胞转化用培养管RPMI1640培养基，过滤除菌，用时加入200mL/L胎牛血清，青霉素100单位/mL，植物血凝素(PHA)50 μg/mL，每只无菌小试管(或小瓶中)中分装1.9mL加盖橡皮塞。

(2)测定　用无菌吸管吸取肝素抗凝血0.1 mL加至淋巴细胞转化管中用橡皮塞塞紧管口。摇匀，置37 ℃二氧化碳培养箱培养72h，此间，每天振摇2次。终止培养后，弃上清，取沉淀涂片。瑞-姬氏复合染色液染色镜检，记数200个淋巴细胞中转化细胞的百分率^[6-7]。

1.2.3.4数据处理与分析　数据以±SD表示，用EXCEL处理，两组间差异性比较采用student’s t检验。

2结果

结果见表1。

表1中药制剂对猪T淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率的影响

Table 1Effect of compound traditional Chinese medicine preparationson the lymphocyte transformation rate and neutrophil phagocytosisrate of pigs

Note：The samerow withsame letters denote non significantdifferenceis indistinctive(P>0. 05)；and withdifferent letters denote significantldifference(P<0.05).

在试验的第30天，与对照组相比，试验Ⅱ组和Ⅲ组猪T淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率差异均不显著。

在试验的第60天，与对照组相比，试验Ⅱ组和Ⅲ组T淋巴细胞转化率差异显著(P<0.05)，试验Ⅱ组与Ⅲ组白细胞吞噬率差异显著(P<0.05)。

3讨论

中药为天然植物，其中的有些活性成分，具有直接抑菌、杀菌，调节机体免疫功能，具有非特异性免疫抗菌作用。胡宇莉等^[5]报道穿心莲对肉鸡淋巴细胞活性及白细胞活性(吞噬率和吞噬指数)有显著的提高作用(P<0.05)。据报道四君子汤可提高动物生长速度，增强免疫力，而经研究证实黄芪具有增强免疫力，抗病毒的功能，故本方采用黄芪加味四君子汤^[6-8]。

T淋巴细胞是体内主要的免疫活性细胞，在胸腺中发育成熟以后经血液、淋巴循环运行定居于外周免疫器官，发挥免疫细胞的功能，以PHA作为促分裂因子来检测淋巴细胞的转化功能，其转化率的高低常作为衡量机体免疫水平的指标，T淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率越高，意味着淋巴细胞在外来因子的刺激下增殖反应越强，机体的细胞免疫能力越强。试验表明，中药复方制剂可明显提高猪的T淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率，这与曾庆国等研究结果一致^[9-12]。说明中药复方制剂能显著提高猪的T淋巴细胞转化率和白细胞吞噬率，从而提高其免疫功能和抗病力。