关键词:气相色谱法;蛹虫草;甘露醇;含量测定
1 仪器和试药
1.1 仪器 Agilent 6890/5973N 气相色谱仪,Mettler AE 240 电子天平(十万分之一) 。
1.2 试剂 吡啶,AR,上海化学试剂总厂,批号:030412;乙酸酐,AR ,无锡县化学试剂厂,批号:840821。
2 方法与结果
2.1 供试品和对照品 蛹虫草,为黄色至黄褐色,东北虎药业股份有限公司生产;甘露醇对照品,美国sigma公司生产,批号20000930 ,含量99.9%。
2.2 测定条件的选择及系统适用性实验 照气相色谱测定法(中国药典2000年版一部),用气相色谱法测定,色谱柱用HP25MS 5% Diphenyl and 95%Dimethylpolysiloxane 毛细管柱(30m×250μm×0.25μm) ;柱温: 程序升温60℃→45℃/min→230 ℃(4min)→45℃/min→300℃(10min);进样口温度200 ℃;检测器温度250℃;不分流进样,载气:氮气,恒流模式,流速:0.8ml/min;检测器温度:250℃;氢气流量:40ml/min;空气流量:300ml/min;尾气吹流量:25ml/min;数据采集速度:20Hz;最小狭缝宽0.01min。理论板数按甘露醇峰计算应不低于1500。
精密吸取供试品溶液1μl,注入气相色谱仪分析, 质谱检测器检测,测定峰高,计算。
2.3 线性关系的考察 精密称取甘露醇对照品1.2,1.7,2.2,2.5,3.1,5.1mg ,分别置20ml顶空瓶中,加无水吡啶(用前以无水硫酸钠脱水)2.5ml 、醋酐5.0ml,混匀,加盖密封瓶口,置烘箱中90℃恒温箱加热1h ,取出,冷至室温, 启封,转移至离心管中,离心,上清液作为对照品溶液。
2.4 供试品溶液的制备 取蛹虫草样品适量,粉碎成细粉,取0.075g ,于五氧化二磷干燥器中放置过夜。精密称定,置20ml顶空瓶中,加无水吡啶(用前以无水硫酸钠脱水) 2.5ml、醋酐5.0ml,混匀,加盖密封瓶口,置烘箱中90 ℃恒温箱加热1h,取出,冷至室温,启封,转移至离心管中,离心,上清液作为供试品溶液。
2.5最低检出限 不断稀释对照品溶液直至色谱峰高比在10 左右,计算此时溶液的浓度,即得甘露醇的最低定量限,结果最低稀释至0.173μg/ ml仍可进行测定。
2.6 空白试验 精密量取衍生化试剂无水吡啶(用前以无水硫酸钠脱水)2.5ml、醋酐5.0ml, 置20ml顶空瓶中, 混匀,加盖密封瓶口,置烘箱中90℃恒温反应1h,取出,冷至室温,启封,转移至离心管中,离心,上清液作为空白溶液,结果表明空白溶剂中并无干扰测定的成分存在。
2.7 精密度试验 取干燥后的蛹虫草,粉碎成细粉,依正文所列方法进行衍生化反应,获得供试品溶液,连续重复进样5 次,测定其中甘露醇峰高,计算其相对标准偏差(%)。
2.8 重现性试验 精密称取干燥后的蛹虫草, 粉碎成细粉, 称取0.075g,平分5份,置20ml顶空瓶中,加入衍生化试剂无水吡啶2.5ml,醋酐5.0ml,振荡混匀,加盖密封,依法衍生化反应,气相色谱法测定,表明本法具有良好的重现性。
2.9 加样回收率试验 采用加样回收法。取蛹虫草适量,粉碎成细粉,精密称取0.075g ,分别精密加入对照品适量,置20ml顶空瓶中,精密加入衍生化试剂无水吡啶2.5ml, 醋酐5.0ml,振荡混匀,加盖密封,气相色谱法测定,计算。结果表明本法具有较好的加样回收率。
3 小结
本方法采用气相色谱法测定蛹虫草中的甘露醇含量,采用毛细管柱、用无水吡啶进行衍生,检测结果比较稳定, 平均回收率101.45 % ,RSD2.62% ,表明方法简便, 可行。
