目的：采用反相高效液相色谱法，对9个产地的生首乌和9个产地的制首乌商品药材中水解前、后蒽醌类成分的含量进行测定。方法：采用Inertsil ODS-3柱，以甲醇-0.1%磷酸(85∶15)为流动相，检测波长254 nm。结果：大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素_search11()\' onmouseover=this.style.cursor=\'hand\'芦荟大黄素 value=芦荟大黄素>芦荟大黄素在水解前的加样回收率分别为98.1%，98.8%，99.2%，99.9%，99.8%，精密度(RSD)分别为0.8%，2.1%，0.9%，1.9%，1.5%，n=5；水解后的加样回收率分别为96.2%，96.1%，98.3%，97.6%，97.4%，精密度(RSD)分别为0.7%，0.6%，1.8%，1.6%，2.2%，n=5。结论：各产地的生首乌和制首乌商品药材中蒽醌类苷元主要为大黄素和大黄素甲醚，某些产地的药材中另含微量的大黄酸、大黄酚和芦荟大黄素，其含量随产地差异较大。
关键词 反相高效液相色谱法 何首乌 制首乌 商品药材 蒽醌类成分
何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的块根。生首乌具有解毒、消痈，润肠通便的功效，制首乌则能补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨。主要含蒽醌类、二苯乙烯苷及磷脂类等活性成分［1］，研究和选择其活性成分，并建立可行的检测方法，对有效地控制质量至关重要。本文采用RP-HPLC法测定不同产地水解前后的生首乌和制首乌中蒽醌类苷元的含量，从而测定样品中游离及结合型蒽醌类成分的含量，以此考察了不同产地的何首乌商品药材的质量。
1 仪器、试剂与试样
岛津LC-10A液相色谱仪，SPD-M10A二极管阵列检测器，Class LC10工作站。
大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素对照品均由中国药品生物制品检定所提供。何首乌由各产地药品检验所提供。甲醇为分析纯，北京化工厂生产。
2 色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-3(5 μm,4.6 mm×250 mm),流动相：甲醇-0.1%磷酸(85∶15)［2，3］，检测波长254 nm，流速1.0 mL*min-1。
3 方法与结果
3.1 线性试验
分别取大黄素、大黄素甲醚、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素对照品，精密称定，加甲醇溶解(必要时加热)并稀释成每1 mL含0.08 mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液。
精密吸取对照品溶液5，7.5，10，15，20 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程见表1。
3.2 供试品溶液制备
取何首乌细粉(过4号筛)1 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称重(准确至0.001 g)，水浴回流 1 h，取出，放冷，称重，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为测定游离型蒽醌的供试品溶液(必要时浓缩或稀释)。
精密吸取上述续滤液10 mL，置锥形瓶中，挥干甲醇，加入2.5 mol*L-1硫酸溶液20 mL，超声处理5 min，加入氯仿20 mL，于沸水浴中回流1 h，取出，冷却，移置分液漏斗中，分取氯仿层，酸水液继续加入氯仿振摇提取3次，每次15 mL，合并氯仿液，无水硫酸钠脱水，置锥形瓶中，回收氯仿，残渣精密加入甲醇10 mL，称重，水浴加热溶解，放冷，再次称重，用甲醇补足减失重量，摇匀，作为测定总蒽醌的供试品溶液(必要时浓缩或稀释)。
3.3 重复性试验 取同一样品(湖南制首乌)5份，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，结果水解前的游离型大黄素、大黄素甲醚含量精密度(RSD)分别为2.2%，1.6%(n=5)；水解后的总大黄素、大黄素甲醚含量精密度(RSD)分别为0.8%，1.4%(n=5)。该样品中大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素水解前后有的为微量，有的则未检出。
3.4 回收率试验 取已知水解前游离型蒽醌及水解后总蒽醌含量样品(湖南制首乌)0.5 g，精密称定，精密加入5种对照品的混合溶液10 mL(浓度为0.08 mg*mL-1)，蒸干，按供试品溶液制备方法制备水解前游离型蒽醌及水解后总蒽醌测定用溶液，依法测定，结果见表2。
3.5 样品测定 精密吸取对照品溶液10～20 μL、供试品溶液5～20 μL，注入色谱仪，进行测定，结果见图1、表3。
4 讨论
4.1 何首乌中蒽醌类成分以大黄素、大黄素甲醚含量较高，大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素含量则较低，此外，游离型蒽醌与结合型蒽醌含量比例也随产地和炮制而发生变化。
4.2 从测定结果看出，四川样品中蒽醌类成分含量最高，而广西、浙江样品含量则较低。流通领域中不同产地的何首乌中蒽醌类成分含量相差较大，可能是生长环境和栽培条件的不同对其的影响，也有可能是采集时间的不同而造成的差异。
4.3 制首乌中游离型蒽醌含量普遍较生首乌中高，这与文献报道的炮制促使蒽醌苷的分解，及制首乌泻下作用明显减弱［4］是一致的。
4.4 根据对何首乌中另一类成分——二苯乙烯苷的含量测定结果［5］(相应样品均与本实验中样品相同)，在不同产地的样品中，蒽醌类成分与二苯乙烯苷含量高低似呈相同趋势，即蒽醌类含量高的样品，其二苯乙烯苷含量也高，反之也相同。其中从广西百色和云南收集的生首乌，其外形与传统 药材有较大差异(云锦花纹不明显，中央有一明显木心)，它们的蒽醌类、二苯乙烯苷成分含量均较低。据分析，可能来源于同属近源植物，故除产地和采集时间因素外，混淆品及地方习用品的使用，也是导致流通领域中何首乌质量参差不齐的原因，因此，建立专属性的含量测定指标，对保证该品种的品质和质量，是非常迫切和必要的。
*结合蒽醌含量=水解后的总蒽醌含量-水解前游离型蒽醌含量