从2003年10月至2004年6月，在河北、辽宁、山东等地区鸡群中大规模发生以神经症状、肠道出血为主的流行性疾病。本文对从河北省某AA肉鸡场的病死鸡中分离的病毒毒株，经过实验室的系统鉴定，证实该分离株具有血凝性，且可被ND标准阳性血清所抑制和中和，不能被AI(H5亚型与H9亚型)标准阳性血清及阴性血清抑制；该分离株的毒价为109.3ELD50/0.1mL，MDT为57.6h，ICPI为1.89，IVPI为2.62，回归试验鸡的临床表现与自然病例基本一致。试验结果证明，该毒株属于嗜神经型新城疫病毒强毒株，并命名为Q-BS株。
一、流行病学调查
从2003年10月至2004年6月，在我国河北、辽宁、山东等地区鸡群中大规模发生以神经症状、肠道出血为主的流行性疾病，主要侵害30～50日龄的青年鸡群，病程持续约1周时间。发病往往是从鸡舍的某一侧开始发病，向外一圈一圈地传播，同一鸡舍内发病鸡分布不均匀，其发病率为20%左右，每天病鸡死亡数保持一定水平，持续数日不减，死淘率一般在10%～30%。发病初期表现拉稀，有呼吸道症状，很快出现显著的神经症状，如仰头、扭脖、角弓反张、瘫痪等，有的鸡只看似正常，尚能采食，一旦人为驱赶，神经症状立即出现并加剧。ND HI抗体监测，结果不一，有时达5log2以上，仍然发病。成年鸡发病率和死亡率均较低，有时仅呈“一过性”发病，临床症状不明显，产蛋鸡仅表现产蛋率下降10%～40%，ND HI抗体监测最高可达到13log2～14log2。
发病鸡的显著病变在肠道。小肠黏膜有弥漫性出血，分布有枣核状溃疡和出血，主要在十二指肠附近、卵黄蒂附近、两个盲肠之间的回肠淋巴结有枣核状隆起或出血。腺胃黏膜上大多无出血点，腺胃与肌胃交界处有鲜红色出血带，但有的地区病鸡呈现腺胃黏膜弥漫性出血；头部皮下出血明显。呼吸道气管内黏液增多或有轻微出血；肾脏肿胀；法氏囊多数萎缩，外观颜色发白，内有少量淡黄色黏液。发病鸡多伴发大肠杆菌和支原体感染，表现心包积液，心包膜增厚粗糙不平、有纤维素性渗出物与心肌粘连，脾脏肿胀2～3倍。产蛋鸡泄殖腔出血、肿胀明显。
二、材料
1.病料：取来自河北省某AA肉鸡场的病死鸡的脑、肝、肺、气管样品。
2.试验用鸡胚和试验用鸡:SPF鸡胚和SPF雏鸡，SPF种蛋由北京梅里亚-维通实验动物技术有限公司提供，SPF鸡胚由瑞普生物药业有限公司孵化室孵育至所需日龄，SPF雏鸡由瑞普生物药业有限公司质检室在负压隔离器中饲养。
3.试验用血清:(1)鸡新城疫(ND)标准阳性血清，由中国兽医药品监察所提供。(2)禽流感(AI)H9亚型与H5亚型标准阳性血清，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供。(3)阴性血清，瑞普生物药业有限公司自制。
4.负压空气隔离器、动物试验场所：瑞普生物药业有限公司提供。
三、方法
1.病料预处理：取病死鸡脑、肝、肺、气管样品混合研碎，用灭菌生理盐水按1∶5稀释，按10 000单位/mL加入先锋霉素，冻融3次，4℃下2 000r/min离心15min。
2.病毒分离：将预处理好的样品按0.2mL/胚接种于10枚10日龄SPF鸡胚，收获24～72h死亡鸡胚的尿囊液(F1)，在SPF鸡胚再传一代(20枚)，收获毒液(F2)作为分离株。
3.分离株的鉴定:(1)血凝价(HA)测定——将分离株按常规方法测定血凝价(HA)。(2) 血凝抑制试验(HI)——用ND标准阳性血清及AI(H5亚型与H9亚型)标准阳性血清分别与分离株进行HI试验。(3)半数致死量(ELD50)的测定——将F2代分离株做10倍系列稀释，每个滴度按0.1mL／胚经尿囊腔途径接种5枚10日龄SPF鸡胚，记录接种后24～72h死亡鸡胚数并观察死亡鸡胚胎儿病变，计算ELD50/0.1mL。(4)特异性试验——将分离株用灭菌生理盐水稀释至103.0ELD50/0.1mL，与等量ND标准阳性血清混合，在室温下中和1h后，经尿囊腔途径接种10枚10日龄SPF鸡胚，0.1mL/胚，观察120h，记录鸡胚死亡情况，并逐个检测鸡胚尿囊液HA。另取5枚10日龄SPF鸡胚，接种按照上述程序处理的分离株与等量灭菌生理盐水混合液，0.1mL/胚，作为阳性对照组。(5)鸡胚最小致死量的平均致死时间(MDT/MLD)、对1日龄SPF雏鸡脑内致病指数(ICPI)、对6周龄SPF鸡静脉致病指数(IVPI)的测定——按常规方法进行。(6)分离株回归试验——将分离株按105.0ELD50／只剂量经肌肉注射途径攻击8只30日龄SPF鸡，观察接种鸡只发病与死亡情况。
四、结果
1.鸡胚死亡及HA测定结果:病料经SPF鸡胚上传2代鸡胚死亡情况及尿囊液HA测定结果见表1。 2．血凝抑制试验(HI)结果:见表2。试验结果表明，分离株的血凝活性可被ND阳性血清所抑制，而不能被AI(H5亚型与H9亚型)阳性血清及阴性血清所抑制。
3.半数致死量(ELD50)测定结果:F2代分离株的毒价为109.3ELD50/0.1mL。死亡鸡胚胎儿全身充血，在头、胸、背、翅及趾部有小出血点。
4.特异性试验结果见表3。
5.鸡胚最小致死量的平均致死时间(MDT/MLD)、对1日龄SPF雏鸡脑内致病指数(ICPI)、对6周龄SPF鸡静脉致病指数(IVPI)测定结果:结果表明，该分离株MLD=10-8.0，MDT＝57.6h，ICPI＝1.85，IVPI＝2.62。
6.分离株回归试验结果:攻毒后48h部分鸡精神沉郁，拉稀，有呼吸道症状，60h左右大部分鸡出现显著的神经症状，如仰头、扭脖、角弓反张、瘫痪等，72h内全部死亡。病理剖检显示，小肠黏膜有弥漫性出血，十二指肠、回肠淋巴结有枣核状出血，腺胃与肌胃交界处有鲜红色出血带，头部皮下出血，气管内黏液增多。回归试验鸡的临床表现与自然病例基本一致。
五、论与小结
1.本试验中从河北省某AA肉鸡场分离的病毒株，具有血凝性，且可被ND标准阳性血清所抑制，不能被AI(H5亚型与H9亚型)标准阳性血清及阴性血清抑制；特异性试验结果证明该分离株能被ND标准阳性血清中和。试验结果表明，该分离株为新城疫病毒。
2.分离株的毒价为109.3ELD50/0.1mL，MDT为57.6h，ICPI为1.85，IVPI为2.62，结合回归试验鸡的临床表现与自然发病鸡症状基本一致，证明该毒株属于嗜神经型新城疫病毒强毒株。
3.为了便于区别，将该毒株命名为鸡新城疫病毒Q-BS株。(参考文献略)(中国农业大学动物医学院李守军；瑞普(保定)生物药业有限公司 杨保收 厉从志 张华玉;河北省畜牧兽医站 崔玉苍 吴秀楼 李 鹏)
