中华人民共和国农业部公告
第 1924
根据《 兽药管 理条例 》规定， 我部组织制定了《氟苯尼考粉和氟苯尼考预混剂中非法添加氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的检查方法》（见附件），现予公布，自发布之日起执行。
附件： 氟苯尼考粉氟苯尼考预混剂中非法添加氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的检查方法
农业部
2013年4月12日
附件
氟苯尼考粉和氟苯尼考预混剂中非法添加
氧氟沙星、 诺氟沙星、 环丙沙星、 恩诺沙星的检查方法
一、适用范围
本方法适用于氟苯尼考粉、 氟苯尼考预混剂中非法添加氧氟沙星、 诺氟沙星、 环丙沙星、恩诺沙星的检查。
二、 检查方法
照高效液相色谱法测定（《中国兽药典》 二〇一〇版一部附录 36 页）。
色谱条件与系统适用性 用十八烷基键合硅胶为填充剂（Waters XBridge C18 色谱柱或性能相当的色谱柱）；以磷酸溶液（取磷酸 3.0ml， 加水至 1000ml， 用三乙胺调 pH 值至3.0±0.1， 加乙腈 50ml） -甲醇（88:12） 为流动相， 流速为每分钟 1ml， 采用二极管阵列检测器检测， 采集波长为 200 nm～400nm， 分辨率为 1.2nm； 记录 283nm 波长处的色谱图。
称取氧氟沙星对照品、 诺氟沙星对照品、 环丙沙星对照品、 恩诺沙星对照品各约 25mg分别置 50ml 量瓶中， 加 2%磷酸溶液-乙腈（1:1） 适量， 超声处理 30 分钟使溶解， 放冷至室温， 用 2%磷酸溶液-乙腈（1:1）稀释至刻度， 摇匀。 各量取 5ml 置同一 50ml 量瓶中，用磷酸溶液（取磷酸 3.0ml， 加水至 1000ml， 用三乙胺调 pH 值至 3.0±0.1， 加乙腈 50ml）稀释至刻度， 摇匀， 作为系统适用性试验溶液。 取 10 μ l 注入高效液相色谱仪，记录色谱图和光谱图。 氧氟沙星、 诺氟沙星、 环丙沙星、 恩诺沙星各相邻色谱峰之间的分离度均应符合要求。
测定法 取供试品 1.0g 置具塞锥形瓶中， 加 2%磷酸溶液-乙腈（1:1） 50ml，超声处理15 分钟， 放冷至室温， 滤过， 取续滤液 5ml，加磷酸溶液（取磷酸 3.0ml， 加水至 1000ml，用三乙胺调 pH 值至 3.0±0.1， 加乙腈 50ml） 稀释至 50ml， 摇匀， 作为供试品溶液。 另取需要验证物质的相应对照品（氧氟沙星、诺氟沙星、 环丙沙星、 恩诺沙星） 各约 25mg， 分别加 2%磷酸溶液-乙腈（1:1）50ml，超声处理 15 分钟使溶解， 放冷至室温； 各取 5ml， 分别加磷酸溶液（取磷酸 3.0ml， 加水至 1000ml， 用三乙胺调 pH 值至 3.0±0.1， 加乙腈 50ml）稀释至 50ml， 摇匀， 作为对照品溶液。 取供试品溶液和对照品溶液各 10 μ l， 分别注入高效液相色谱仪， 同时记录色谱图和光谱图。 通过与对照品液相色谱图保留时间、 光谱图的比对，确定供试品中是否含有氧氟沙星、诺氟沙星、 环丙沙星、 恩诺沙星。
三、 结果判定
1、 在相同实验条件下， 供试品色谱图中如出现色谱峰与相应对照品峰保留时间一致（±5%），在大于 200nm 的波长范围内， 供试品出现的色谱峰和相应对照品峰相对峰高大于 10%时， 两者光谱图无明显差异（必要时可调整供试品溶液的浓度）， 最大吸收波长一致（±2nm），判定为检出氧氟沙星、诺氟沙星、 环丙沙星、 恩诺沙星。
2、 供试品溶液色谱图中如出现与相应对照品保留时间一致的色谱峰， 但峰面积小于检测限峰面积， 判定为未检出氧氟沙星、 诺氟沙星、 环丙沙星、恩诺沙星。
四、 检测限
本测定法的检测限为 0.5mg/g。
附图：
图 2 氧氟沙星、 诺氟沙星、 环丙沙星、 恩诺沙星的光谱图
起草单位： 河南省兽药监察所
复核单位： 中国兽医药品监察所
江苏省兽药饲料质量检验所
