仔猪大肠杆菌病病原鉴定及药敏试验

仔猪大肠杆菌病病原鉴定及药敏试验

仔猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪黄白痢和水肿病。其中黄痢多发生于1周内哺乳仔猪Ⅱ， ，病猪主要表现为排黄色糊状粪便；白痢多发生于10~30日龄，病猪主要表现为排乳白色或灰白色腥臭糊状粪便。随着养猪业规模化发展，该病呈上升趋势，致使仔猪成活率和断乳窝重降低，严重影响了养猪业的发展。由于致病性大肠杆菌存在广泛耐药性，而且血清型多，抗原复杂，给防治带来了困难。本文对广东某猪场腹泻严重的仔猪黄白痢病料进行了细菌分离鉴定和药敏试验，以期为仔猪大肠杆菌病的有效防治提供一些技术资料。

1 材料和方法 1．1 材料 1．1．1 病料广东某猪场严重腹泻仔猪中采集的12份粪便样品。 1．1．2 培养基麦康凯琼脂培养基、伊红一美蓝琼脂培养基，购于广州环凯生物技术开发有限公司。普通肉汤培养基自制。 1．1．3 药敏纸片 杭州天和微生物试剂公司生产。 1．1．4 铝胶华南农业大学传染病实验室保存。 1．1．5 实验动物 昆明小鼠20 g左右，为清洁级，购自南方医科大学实验动物中心。 1．2 方法 1．2．1 病原菌的分离鉴定无菌采集具有黄痢、白痢症状的仔猪粪便，接种于麦康凯培养基上， 37~C温箱中培养24 h。挑取红色中等大小光滑菌落，接种于普通肉汤增菌，置37~C温箱培养16～18 h，然后将培养物分别划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板进行细菌培养，24 h后挑取平板上可疑菌落抹片染色镜检，后将疑似菌落少许再接种于普通肉汤，供以后试验用。 1．2．2 生化试验糖发酵、M．R、H。s、V—P、吲哚试验等。 1-2．3 药敏试验利用庆大霉素、卡那霉素、链霉素、复方新诺明等13种药物按常规纸片法进行。 1．2．4 致病性试验将分离菌的肉汤纯培养物对6只健康小鼠分别腹腔注射0．2～0．4 mL／只，另2只小鼠为对照，24~48 h死亡或发病者取心血抹片，革兰氏染色、镜检。并取病料接种于麦康凯琼脂。 1-2．5 仔猪黄、白痢菌菌苗(本场)制备对分离鉴定的本场(地)大肠杆菌菌株，37℃培养，用无菌生理盐水制成菌悬液，活菌计数浓度为30亿个／mL，加入甲醛，37℃灭活48 h，加入铝酸佐剂和无菌生理盐水，至菌液浓度为10亿个／mL。

2 结果 2．1 病原菌的形态观察6个疑似菌株在麦康凯琼脂培养16 h后均为红色菌落，在伊红美蓝琼脂上培养16 h后均为紫黑色带金属光泽的中等大小圆形菌落，革兰氏染色镜检均为革兰氏阴性中等大小杆菌。 2．2 生化鉴定 分离的6株细菌都能发酵葡萄糖、麦芽糖和乳糖，并产酸产气；部分菌株不分解蔗糖，不产生硫化氢，吲哚和甲基红试验(M．R)均为阳性，V-P试验为阴性，由此可判定分离菌株为大肠杆菌。 2．3 药敏试验所有分离菌均对头孢噻肟、头孢拉啶、诺氟沙星等药物敏感，而对其他药物产生了不同程度的耐药性。2．4 致病性试验试验组中有4只小鼠在24 h 内死亡，1只在30 h死亡， 另1只发病；对照组小鼠不发病。发病及死亡小鼠的心血抹片经革兰氏染色镜检为革兰氏阴性中等小杆菌。 2．5 仔猪黄、白痢菌苗免疫效果将分离的6株菌株混合制备成铝胶灭活菌苗，按5 mL／只剂量接种产前10---．15天的母猪。经猪场试验，免疫母猪后代的黄、白痢发病率大大降低，而对照组仔猪仍有较高的发病率。

3 小结

3．1 从猪场分离的6株细菌，经培养特性、形态、生化试验及致病性试验鉴定，表明均为致病性大肠杆菌。

3．2 药敏试验结果表明6株大肠杆菌对头孢噻肟、头孢拉啶、诺氟沙星等药物敏感，而对复方新诺明等药物产生了严重的耐药性。

3．3 通过对分离菌的药敏试验，该猪场选择敏感的药物头孢拉啶、诺氟沙星进行治疗，取得了理想的效果。但是在停药后部分猪又出现腹泻症状，不能很好地控制该病，这与临床上滥用抗生素关系密切，导致了大肠杆菌的耐药性。因此，防治该病的重点是预防为主，提高仔猪抵抗力，抓好母猪和产房环境卫生、搞好猪瘟等疫病的防疫工作。

3．4 目前防治仔猪大肠杆菌病所采取的措施之一是给临产母猪注射大肠杆菌多价菌苗，即在母猪临产前15天和45天各注射1次大肠杆菌多价菌苗。但注射菌苗后所产仔猪仍发生仔猪黄白痢，表明引起仔猪黄自痢的大肠杆菌血清型与其所用菌苗的血清型不一致。我们根据猪场实际情况，制备了铝胶灭活苗，经猪场试验，免疫母猪的后代黄、白痢发病率大大降低，而对照组组仍有较高的发病率。因此防治本病应使用与本场流行的血清型一致的菌株进行免疫。