摘 要：对新分离的和缓艾美耳球虫进行了致病性研究。结果表明，21日龄雏鸡感染1 000个和5000个孢子化卵囊未见异常表现，肠道未发现肉眼可见的病理变化。20 000个卵囊感染可引起轻微病变，100 000个和500000个卵囊感染能产生较明显的致病作用，与对照组相比增重分别为70.3%和56.8%。根据肠道病变记分标准，肠道有明显可见的病变，所有试验鸡均未出现死亡。
关键词：和缓艾美耳球虫；致病性；孢子化卵囊；雏鸡
和缓艾美耳球虫(Eimeria mitisTyzzer)在我国分布很广，已有15个省、市发现了该虫，但对其致病性的研究未见详细报道。一般在自然条件下往往与其他球虫混合感染，从而加剧了球虫的致病性[1]。
和缓艾美耳球虫致病力较弱，低剂量感染后无明显肉眼可见的病变[2]，但影响鸡只增重。致病性仅在大剂量感染的情况下可见，主要表现为生长变慢，产蛋减少，腿、喙部角质鳞片区黄色素减少，肠表面苍白，小肠肠壁变薄，肠内容物稀薄等。
以前有的报道中提及和缓艾美耳球虫缺乏特征性病变[3]。但是近年来的研究表明，和缓艾美耳球虫引起的亚临床性球虫病对饲料转化率有较大影响[4]。试验的目的是证实和缓艾美耳球虫新疆石河子株的致病性、寄生部位及对养鸡业产生的影响，为养鸡生产提供更多的数据及更详尽的资料。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 病原 和缓艾美耳球虫卵囊从新疆石河子市某发病鸡场粪样中分离、纯化获得的和缓艾美耳球虫，试验前1个月内感染雏鸡收取卵囊，孢子化[5]备用。
1.1.2 器材 无菌鸡舍，无菌注射器，无菌烧杯，无菌手套。
1.1.3 药品 50 g/L重铬酸钾溶液，生理盐水。
1.1.4 实验动物 144只罗曼品种雄性雏鸡。
1.2 方法
1.2.1 分组方法 参照文献[6]，给所有鸡只佩戴号码并立即称重，对应鸡号记录体重。选取体重为340 g～410g范围的鸡只作为实验用鸡，以减少鸡只体重在实验中造成的误差。再将此范围鸡只体重的编号从轻到重排列，编号循环分为18个级别，每个级别8只鸡，每3个级别为一个组，总共6组，其中包括5个试验组和一个空白对照组，每组24只鸡。将鸡只放入相应鸡笼，随即进入无球虫饲养状态。
1.2.2 感染卵囊 试验组从低到高选取5个剂量，分别人工经口感染1 000、5 000、20 000、100 000、500000个卵囊/只，对照组灌服生理盐水。
1.2.3 观察鸡只状态 感染和缓艾美耳球虫孢子化卵囊后的6d内，每天观察所有鸡只的精神状态、饮欲食欲和排出粪便的性状、颜色等情况，并及时记录。
1.2.4 鸡只称重 感染和缓艾美耳球虫孢子化卵囊后的第6天，所有鸡只按组逐一进行称重，并记录重量。
1.2.5 鸡只处死方法 颈椎枕骨大孔断离法[7]。
1.2.6 观察病变及肠道记分 根据肠道上皮颜色、肠内积存液体的多少及肠壁厚度、黏膜侵蚀状况、肠道扩张程度等，并根据这些变化制定了一个肠道计分标准或可以简化为全肠道0～4分记分标准。肠道病变与正常鸡肠道相似，无任何病变，计为0分；肠道病变是小肠后段变白，肠壁轻微变薄，肠黏膜面受到侵蚀但仍然可见，肠内有少量渗出液的计为1分；肠道病变从十二指肠到直肠的肠壁苍白，肠壁明显变薄，肠黏膜完全受损，整个肠道内有较大量白色渗出液的计为2分；当整段肠壁苍白近乎透明，肠黏膜严重脱落，肠道内充满渗出液，内容物稀薄如水时，肠道病变计为3分；鸡只因球虫病死亡时，计为4分。
2 结果
2.1 临床表现
每只感染和缓艾美耳球虫1 000、5 000、20 000个卵囊试验组的鸡，在感染后的6 d内均没有发现任何临床症状。每只感染100000个卵囊鸡，在感染后的第4天出现轻微的精神不振，在感染后的第5天采食量有明显的减少，而且羽毛松散。每只感染500000个卵囊的鸡，在感染后的第4天出现轻微的精神沉郁，少动，在感染后的第5天采食量明显的下降，羽毛松散，有的鸡只羽毛逆立，喜欢拥挤在一起，肛周羽毛因排泄物污染略有粘连。感染卵囊鸡只有不同程度腿、喙部角质鳞片区黄色素减少。
每只感染20 000个卵囊的鸡第6天的鸡与对照组鸡比较，肉髯色素略褪去，略显苍白，脚部色素略有褪去。每只感染100000个卵囊的鸡，第6天的鸡与对照组鸡比较，肉髯色素褪去较明显，脚部略显苍白。每只感染500000个卵囊的鸡，第6天的鸡只与对照组鸡比较，肉髯苍白，脚部色素褪去明显，苍白。
2.2 平均增重
感染后的第6天，每只感染1 000、5 000、20 000、100 000、500000个卵囊的鸡，相对增重率分别为对照组的98.6%、99.7%、95.6%、70.3%、56.8%(表1)。
2.3 死亡率
试验中，每只感染1 000、5 000、20 000、100 000、500 000个卵囊的鸡，均未出现死亡(表1)。
2.4 肠道记分
感染后第6天处死，分别观察到不同感染剂量的鸡只肠道病变。每只感染1 000个卵囊和5000个卵囊组各随机选取9只鸡，剖检肠道无明显可见的病变。每只感染20000个卵囊组鸡只中有一些鸡只没有可见的病变，而一些的小肠下段略有苍白、迟缓，小肠绒毛轻微萎缩，且肠壁略微变薄。每只感染100000个卵囊和500000个卵囊试验组鸡只出现较前几组重的病变，腿喙部角质鳞片区黄色素减少，肠表面苍白，肠壁变薄，肠腔有胀气，肠内容物稀薄，呈橘黄色，有个别可见水样稀粪；个别小肠后段甚至整段肠体还可见针尖状红色出血点和肉眼可见的针尖状白点(表1)。
表1 和缓艾美耳球虫对雏鸡致病性试验结果
Table 1 Pathogenicity results of E.mitis chicks with infected
组别 Groups (卵囊、oocysts) | 平均初重/g Initial average weight | 平均末重/g Final average weight | 平均增重/g Average weight gain | 相对增重/% Comparative weight gain | 病死率/% Mortality | 平均肠道记分 Average score of intestine |
0 | 175.7 | 243.8 | 68.0A | 100.0 | 0 | 0 |
1 000 | 175.2 | 240.4 | 65.2A | 98.6 | 0 | 0 |
5 000 | 175.1 | 240.8 | 65.9A | 99.7 | 0 | 0 |
20 000 | 175.6 | 240.8 | 65.0A | 95.6 | 0 | 0.93 |
100 000 | 175.3 | 223.1 | 47.8B | 70.3 | 0 | 1.43 |
500 000 | 175.4 | 214.1 | 38.6B | 56.8 | 0 | 2.37 |
注：生物统计显著水平P<0.01；生物统计结果各组之间差异极显著，A和B之间也是差异极显著。
Note：Biometry significance level P<0.01；Biometry resultofdifference amongeach group is extremelysignificant，the differenceis also extreme significant between A and B.
3 讨论
和缓艾美耳球虫致病性较弱，低剂量感染后无明显可见的病变或出现轻微的致病性；致病性仅在大剂量感染的情况下可见，但报道的情况有不少差别[8]。Steve在用6.8×106个孢子化和缓艾美耳球虫卵囊感染蛋鸡时发现，在感染后第5天排水样粪便，到第8天停止，同时产蛋量下降。所以本试验尝试从低到高选取5个剂量，分别是每只感染1000、5 000、20 000、100 000、500 000个卵囊感染鸡只，分别作临床症状观察和肠道病变记分。
在以前的报道中通常看不到散在肠道病变，但是可以引起增重不良和失去色素。试验感染高剂量卵囊后，不仅出现了较为明显的临床症状，例如采食量明显下降，羽毛松散逆立，喜欢拥挤在一起，肛周羽毛因排泄物污染略有粘连，还出现了明显的病变，腿喙部角质鳞片区黄色素减少，肠表面苍白，肠壁变薄，肠腔有胀气，肠内容物稀薄，呈橘黄色，有个别可见水样稀粪。在试验中还见到个别小肠后段甚至整段肠体还可见针尖状红色出血点和肉眼可见的针尖状白点，这在其他同类的报道中是较少见的。
但是和缓艾美耳球虫一般在自然条件，往往与其他球虫混合感染，其他种类球虫的典型病变也往往掩盖了和缓艾美耳球虫的细微变化，加之和缓艾美耳球虫缺乏特征性病变，故往往被忽略。近年来的研究表明，和缓艾美耳球虫引起的亚临床性球虫病对饲料转化率有较大影响。所以在实际生产中，缓艾美尔球虫病对经济的影响还有待于进行深入的调查和研究。