摘 要：以等比浓度灌胃法测定苍术挥发油对小鼠的急性毒性，采用改良寇氏法计算苍术挥发油对小鼠的半数致死量(LD50 )。测得LD50为2245.87 mg/kg，LD50的95%可信限为1 958.3 mg/kg～2 575.7mg/kg，表明苍术挥发油有一定毒性，应引起临床用药的注意。
关键词：苍术；挥发油；LD50；小鼠
苍术为菊科植物茅苍术或北苍术的干燥根茎。性温，味辛、苦；具有燥湿健脾、祛风散寒、明目的功效。主治脘腹胀满，泄泻，水肿，脚气痿躄，风湿痹痛，风寒感冒，夜盲[1]。苍术主要含挥发油，由一系列的倍半萜、聚乙烯炔类及少量的酚类、有机酸类等组成[2]。挥发油的主要成分是β桉叶醇、茅术醇、苍术酮，有促进胃肠运动[3] 、抗氧化作用[4]、增强琥珀酰胆碱诱导的神经肌肉麻醉阻断作用等[5]。为了给临床用药提供理论依据，进行了半数致死量测定。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试药 苍术挥发油，由中医药大学提取并提供，批号：060915。
1.1.2 试验动物 昆明小鼠，体重为20 g±2g，雌雄各半，由中国科学院遗传与发育生物学研究所提供，许可证编号20020006。
1.2 方法
1.2.1 供试溶液的配制 称取苍术挥发油16.9 g和吐温80 33.8 g，溶于灭菌双蒸水中，定容到65mL，配制成浓度为260 g/L苍术挥发油溶液，室温保存备用(此浓度的吐温80不会引起小鼠中毒)。
1.2.2 小鼠急性毒性试验 预试验前对小鼠进行 7 d的喂养观察，观察期内小鼠自由采食、饮水。在反复大跨度摸索剂量范围的基础上，再做批量的预试验。
预试验将小鼠随机分成7 组，每组 4只，雌雄各半，各组按等比浓度灌胃给药，确定试验小鼠0%和100%死亡的剂量范围。根据预试验所用剂量，按公式求出正式试验的剂量比 r。
r ＝log－1(logb－loga/n－1)
式中：r ＝相邻两组剂量的比值；b ＝最大剂量；a ＝最小剂量；n ＝预分组数。
正式试验时将小鼠随机分成 6 组，每组 10 只，雌雄各半，组间计量比值为 r，按1∶K (K＝1/r)等比稀释法，配制等比浓度挥发油药物，按 0.2 mL/10 g灌胃给药，观察记录各组小鼠死亡数。
给药后观察小鼠的临床症状(皮肤、黏膜、毛色、眼睛、呼吸、心血管系统、生殖泌尿系统、胃肠系统、自主及中枢神经系统行为表现及变化情况)，对死亡小鼠及时剖检，观察病理变化。
根据改良寇氏法公式计算半数致死量(LD50 )：LD50＝ lg－1[Xm－i (Σp－0.5)]；LD50的95%可信限＝lg－1(LD50±1.96×Sx50)；Sx50＝i
式中：Xm＝最大剂量组剂量的对数值；i ＝剂间比的对数值；Σp＝各组死亡率之和；p＝各组死亡率；q＝各组存活率，q＝1－p；n＝各组动物数；Sx50＝ lg LD50的标准误差。
2 结果
2.1 苍术挥发油对小鼠的急性毒性试验结果
2.1.1 苍术挥发油对小鼠急性毒性试验的预试验结果 初步确定0%和100%死亡剂量分别是1 077.3 mg/kg和4 000.0mg/kg。根据公式计算结果r ＝1.3。
2.1.2 苍术挥发油对小鼠的急性毒性试验 试验结果见表1。
将表1数据代入改良寇氏法公式中计算得出：
LD50＝2 245.87 mg/kg
LD50的95%可信限为1 958.3 mg/kg～2 575.7 mg/kg。
表1 苍术挥发油对小鼠的急性毒性试验结果
Table 1 The results of acute toxicity using volatile oil ofAtractylodes chinensis
组别 Groups | 动物数 Animal number | 染毒剂量/(mg·kg－1) Exposure doses | 剂量对数 Dose log | 死亡动物数 Death number | 死亡率 Mortality | 存活率 Survival rate | p×q |
1 | 10 | 4 000.0 | 3.602 | 10 | 1 | 0 | 0 |
2 | 10 | 3 076.9 | 3.488 | 8 | 0.8 | 0.2 | 0.16 |
3 | 10 | 2 366.9 | 3.374 | 5 | 0.5 | 0.5 | 0.25 |
4 | 10 | 1 820.7 | 3.260 | 3 | 0.3 | 0.7 | 0.21 |
5 | 10 | 1 400.5 | 3.146 | 1 | 0.1 | 0.9 | 0.09 |
6 | 10 | 1 077.3 | 3.032 | 0 | 0 | 1 | 0 |
∑p＝2.7 ∑pq/n＝0.071 |
给药后小鼠活动减少，趴卧不动，运步失调，对外界反映降低。呼吸减慢，次数由120次/min～180次/min降低到60次/min左右，采食量下降或不采食，体重减轻；未死亡的小鼠，给药1d后恢复正常，继续观察7 d未发现异常，采食、活动恢复正常。
部分小鼠死亡时，脸面部、尾巴发黑。4 h内死亡小鼠解剖无明显的病理变化；延长至48h内死亡小鼠剖检时可见膀胱集尿、胆汁分泌增多、肺充血或淤血；部分小鼠有肠道水肿，甚至胃底和十二指肠出血；晶状体混浊，其他未见异常。
3 讨论
苍术挥发油对昆明小鼠灌服给药的急性毒性试验得LD50为2 245.87 mg/kg体重，95%可信限为1 958.3 mg/kg～2575.7mg/kg体重。根据化学物急性毒性(LD50)剂量分级表，苍术挥发油分级为低毒。试验过程中小鼠出现少动、运步失调，呼吸减慢等中毒表现，也说明苍术挥发油具有一定的毒性，应引起临床用药的注意。
苍术挥发油对小鼠机体的影响，苍术中含有的β桉叶醇、茅术醇对小鼠有镇静作用，抑制小鼠自发活动[6]，这可能是给小鼠灌服苍术挥发油后中毒时出现活动减少、趴卧、对外界反映降低等临床症状的原因，而膀胱蓄尿可能与苍术挥发油的利尿作用有关[7]。苍术含有的苍术素能促进胆汁分泌作用[6]，这与解剖时出现的胆汁增多症状相符。小量苍术挥发油有抑制心搏、减慢心率及镇静作用；大量可致心脏麻痹，使呼吸麻痹而致死[8]。大剂量试验组中小鼠死亡的主要原因可能与其对心血管及呼吸抑制有关，而其具体的毒性成分及中毒机理尚有待更进一步探讨。