一例病死金丝猴的病原分离鉴定与病理形态学观察

摘　要：对甘肃省某动物保护中心1只病死金丝猴进行了详细的病原分离鉴定与病理学观察。病原分离鉴定证实为多杀性巴氏杆菌感染。剖检可见金丝猴肺脏体积增大，高度淤血呈典型的大叶性肺炎，心脏、肝脏、肾脏、脾脏及肠系膜淋巴结等实质广泛充血、出血。病理组织学观察，肺脏有严重的充血和水肿，肺泡内有出血性和纤维素性渗出物，呈大叶性肺炎的充血水肿期和红色肝变期。其他组织器官的实质细胞广泛变性、坏死。

关键词：多杀性巴氏杆菌；分离鉴定；病理学；金丝猴

金丝猴为我国所特有的稀世珍兽，与大熊猫并誉为“第二国宝”[1]。近年来，甘肃省许多繁育中心，在人工繁殖金丝猴数量不断增多的同时，时有金丝猴感染疾病死亡的案例发生。2007年6月，甘肃省某动物保护中心饲养的3只金丝猴出现明显食欲不振，精神沉郁，体温升高达40℃，排出水样稀粪或黏稠的粪便。其中1只于次日死亡，为查明死因，对死亡金丝猴进行了详细的病理学检查及病原分离鉴定，确诊为金丝猴巴氏杆菌病。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　动物　甘肃省某动物保护中心一只急性死亡的4岁母猴。

1.1.2　主要试剂与器械　美蓝染液，革兰氏染液，琼脂糖，血液琼脂平板，麦康凯琼脂平板，血清肉汤，血清琼脂斜面培养基，半固体培养基，水解酪蛋白培养基及主要生化反应试剂；KW­1型电热培养箱，Reichertrlisto STAT手摇式切片机，LEICA BME双目光学显微镜，OLYMPUSBX­UCB/BX61型光学显微镜及图像采集系统。

1.2　方法

1.2.1　病原分离鉴定 参照文献[2]，将病料触片和血液涂片，分别进行革兰氏染色和碱性美蓝染色，镜检。

将病料接种在血清肉汤中增菌培养，经24 h后，取肉汤培养物分别接种于血液琼脂平板、血清培养基、半固体培养基、麦康凯培养基上，37℃培养18 h～24 h，观察菌落特征，再挑选典型菌落接种到斜面培养基上，保存。将接种于肉汤培养基18 h～20h的各菌株菌液，移种于糖发酵培养基中37 ℃培养24 h～48 h，观察发酵情况。

1.2.2　病理学观察　对死亡金丝猴进行详细的尸体剖检和观察，然后，分别切取心、肝、脾、肺，肾等组织各1块～2块(每块约1cm3)，固定于100 mL/L的中性福尔马林溶液中。常规石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜观察及图像采集系统照相。

2　结果

2.1　病原分离鉴定

病料涂片革兰氏染色可见大量典型的红色球杆菌，美蓝染色呈明显的两极着色杆菌。病料肉汤37 ℃培养24h后开始呈轻微混浊，于管底生成黏稠沉淀物，振摇后不分散，在培养液顶层形成菌环；病料血清琼脂培养24h后，培养基上可见淡灰白色、湿润、圆形，直径约1 mm～3mm，半透明、边缘整齐、表面光滑、露珠状小菌落，菌落周围无溶血现象；挑取上述细菌在半固体培养基中培养24 h，无运动性。

生化培养显示其特性与多杀性巴氏杆菌相同(表1)。

2.2　病理学观察

眼观可见眼睫膜苍白，腋下和颈部皮下有程度不等淤血与出血，体表淋巴结出血、水肿。胸腔、心包腔有较多淡红色浑浊积液，心内膜与心外膜可见大量出血斑点，心室内淤积凝固不良的血液，心肌发黄。

表1　生化培养实验结果

Table 1　Result of biochemical assay

Note： “＋”means positive，“－”means negative.

肺脏高度肿大，呈花斑状，尖叶、心叶及膈叶表面与切面均可见大小不等紫红色、灰红色实变区，质地犹如肝脏。腹腔也可见大量淡红积液。肝脏肿大，表面与切面颜色发黄，结构模糊，从切面流出凝固不良的血液，胆囊肿胀，胆汁淤积。脾淤血、质地柔软，切面流出凝固不良的血液，结构模糊不清。肾脏质地较软，土黄色，切面结构不清。胃、肠黏膜有程度不等的淤血、水肿，局部有出血，肠腔内可见混有泡沫的稀糊状粪便。肠系膜淋巴结程度不等的出血、肿大。胰腺出血、水肿。

光镜下可见肺脏的肺泡壁毛细血管高度扩张淤血，肺泡腔有较多脱落的肺泡上皮细胞、红细胞，并可见大量纤维素的渗出，呈大叶性肺炎的充血水肿期和红色肝变期[3­4](图1，图2)。心脏的心肌纤维程度不等的变性、坏死，肌纤维间水肿(图3)。肝脏淤血，肝细胞广泛颗粒变性、水泡变性及坏死，间质可见炎性细胞浸润(图4)。脾脏淋巴组织广泛坏死，残存的脾小体体积缩小，数量减少，并可见程度不等的淤血与出血(图5，图6)。

图1　肺泡壁毛细血管高度扩张含有多量红细胞，肺泡腔有大量炎性渗出物(10×)

Fig.1　The capillary vessel in alveolar wall congesteolseriously，alveolar space(40×)

图2　肺泡腔可见大量渗出的纤维素和脱落的肺泡上皮细胞(40×)

Fig.2　Many transudatory cellulose and deciduousalveolar There weremany inflammatory exudates in alveolar space(10×)　epithelial cellswere seen in

图3　心肌纤维变性、坏死(10×)

Fig.3　The denaturation and necrosis of the cardiacmuscle fiber(10×)

图4　肝淤血，肝细胞广泛的颗粒变性、空泡变性、坏死(10×)

Fig.4　Hepatic congestion，and granular degeneration，vacuole，necrosiswere found in hepatic cell(10×)

图5　脾小体萎缩，周围组织坏死，充血，出血(40×)

Fig.5　The depauperate acinus lienalis，necrotic，hematose andhemorrhagic in ambient tissue(40×)

图6　脾大量淋巴组织坏死，红髓内可见大量纤素渗出(40×)

Fig.6　Many lymphatic ttissue became necrosis transudatory cellulosewere observed in red pulp(40×)

3　讨论

金丝猴是我国一级保护动物，目前对金丝猴的疾病研究报道主要集中在金丝猴的双球菌病感染[5]、金丝猴肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌的感染[6]以及金丝猴的心肌炎[7]等，而关于金丝猴巴氏杆菌感染及其病理变化特点到目前为止未见相关报道。本研究通过对死亡金丝猴进行详细的病理学检查及病原分离鉴定，首次观察到金丝猴巴氏杆菌病的病理变化特点。

家畜巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的一种急性传染病，其主要呈急性败血性经过。在病理变化中，纤维素性肺炎常常是重要的表现之一[8­9]。研究发现，金丝猴巴氏杆菌病也常呈急性经过，并且，肺脏的大叶性(纤维素性)肺炎变化也是其重要的病理表现形式之一。在显微镜下，肺泡壁毛细血管高度扩张淤血，肺泡腔有大量纤维素的渗出，呈典型的淤血水肿和红色肝变表现。除肺脏外，其他实质器官则多表现程度不等的变性、坏死、水肿，甚至也可见纤维素的广泛渗出。可见上述病变特点与其他家畜，尤其是牛、羊巴氏杆菌病的病理改变有一定的相似性。

家畜巴氏杆菌病的发生常常与许多诱发因素有密切的关系，如饲养管理不良、环境突然改变、温度变化剧烈、长途运输等都可导致该病的暴发[10]。调查表明，该动物保护中心所在地，金丝猴发病前很长一段时间气温变化剧烈，日夜温差很大，持续很长时间有中到大雨，加之管理人员饲养管理不到位等也都成为诱发金丝猴巴氏杆菌病的重要因素。