摘 要：为探讨免疫接种5种猪肺炎支原体疫苗后血清抗体的变化规律，选用120头健康仔猪作为实验动物，随机分成A、B、C、D、E5个试验组和1个对照组，每组20头猪。在7日龄和21日龄左右，按照各个疫苗厂商提供的最佳免疫程序，对试验组的仔猪进行免疫接种，对照组的仔猪颈部肌肉注射2.0mL生理盐水。分别于20、50、80、140日龄采血分离血清，并用ELISA方法检测血清中的猪肺炎支原体抗体水平。结果表明，不同疫苗免疫接种试验猪后抗体产生不同。20日龄时，各试验组抗体水平差异不显著(P>0.05)，且抗体阳性率不高；50日龄时，抗体阳性率明显升高，A、C两组产生的抗体水平极显著高于B、D组及对照组(P<0.01)，E组极显著高于D组及对照组(P<0.01)，B组显著高于D组及对照组(0.01
关键词：猪支原体肺炎；猪肺炎支原体；疫苗；抗体
猪支原体肺炎(Mycoplasma pneumonia of swine，MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae，M.hyo)引起的一种慢性呼吸道传染病，又称猪流行性肺炎(Enzootic pneumonia ofpigs)[1]或“喘气病”，是引起猪呼吸道综合征(Porcine respiratorysyndrome)的主要病原之一[2]。猪感染猪肺炎支原体后，会引起生长速度减慢，肺部损伤增加，治疗费用多，饲料转化率降低，对养猪业带来严重的经济损失[3]。随着集约化养猪业的快速发展，规模化猪场防控该病显得越来越重要。
免疫接种猪肺炎支原体疫苗是防控该病的重要之一，接种疫苗可减少肺部损伤，提高料肉比及缩短出栏时间[4]。在国外，关于猪肺炎支原体疫苗对猪群保护效果的研究较多[56]，在国内，还未见接种猪肺炎支原体疫苗后，系统的用ELISA方法检测抗体变化规律的文献报道。本实验在广西农垦集团永新畜牧有限公司良圻原种猪场进行试验，从抗体变化规律的角度对猪支原体肺炎疫苗进行探讨，为进一步对猪肺炎支原体疫苗的合理评价和最佳免疫程序提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验用动物及分组
选取20头同期产仔的健康母猪(每胎母猪必须有6头以上仔猪)，从每头母猪所产的体重相近的健康仔猪中，随机选取6头大小均一的仔猪分配给A、B、C、D、E及F(对照)组，每组20头仔猪，共120头仔猪，广西农垦集团永新畜牧有限公司良圻原种猪场提供。给每头仔猪打上相应耳缺号，A组的20头仔猪耳牌号分别为A11、A12…A120，B组的分别为B11、B12…B120，C组的分别为C11、C12…C120，D组的分别为D11、D12…D120，E组的分别为E11、E12…E120，对照组分别为F11、F12…F120。按照常规三点饲养进行管理，仔猪于21日龄断奶，65日龄转入育肥舍。每栏一组，6组试验猪置于同一栋猪舍，所有试验用动物采取相同的饲养和管理方法。
1.2 主要试剂
美国IDEXX公司猪肺炎支原体抗体检测试剂盒；猪肺炎支原体疫苗由国内外5家著名的疫苗公司提供。
1.3 疫苗免疫程序
A、B、C、D、E5个试验组的仔猪，分别在7日龄和21日龄按照疫苗厂商提供的免疫途径和剂量免疫接种，F照组分别在7日龄和21日龄颈部肌肉注射2.0mL生理盐水。
1.4 采血及抗体检测
每组随机抽取15头试验动物，分别于20日龄、50日龄、80日龄和140日龄通过前腔静脉采血并分离血清。按照ELISA抗体检测试剂盒的说明书进行检测，在650nm测量和记录样品和对照的吸光值。检测结果的判定标准为：S/P<0.3为阴性，S/P>0.4为阳性，0.3≤S/P≤0.4为可疑。
1.5 试验结果统计与分析
试验结果以平均值±标准差表示，用SPSS14.0统计软件对试验数据进行方差分析，用邓肯氏新复极差法进行多重比较。
2 结果
2.1 各组OD值的变化规律及差异显著性分析
不同疫苗对试验猪的抗体产生的影响不同，由表1可以看出：在20日龄时，各试验组抗体水平之间差异不显著(P>0.05)，各试验组与F组的抗体水平也无显著差异(P>0.05)；在50日龄时，A、C组产生的抗体水平极显著高于B、D两组及对照组(P<0.01)，E组抗体水平极显著高于D组及F组(P<0.01)，B组抗体水平显著高于D组及对照组(0.01
表1 试验组猪肺炎支原体抗体水平
Table 1 The OD value of M.hyo antibody
组别 Groups | 20日龄 20th day | 50日龄 50th day | 80日龄 80th day | 140日龄 140th day |
A | 0.175±0.037 | 0.398±0.061aA | 0.266±0.044A | 0.447±0.078AB |
B | 0.181±0.041 | 0.241±0.023bBC | 0.153±0.014BC | 0.484±0.089A |
C | 0.169±0.028 | 0.403±0.056aA | 0.217±0.034AB | 0.411±0.081AB |
D | 0.185±0.031 | 0.117±0.010cC | 0.104±0.007C | 0.279±0.028AB |
E | 0.174±0.026 | 0.319±0.035abAB | 0.212±0.027AB | 0.419±0.088AB |
F | 0.182±0.031 | 0.123±0.010cC | 0.097±0.008C | 0.185±0.026B |
Note：①Values with the same letters within the same line have nosignificant difference(P>0.05)；②Values with different smallletter within the same line have significant difference (0.01
2.2 猪肺炎支原体抗体阳性率变化规律
从图1可以看出，在20日龄所有试验组有一定的肺炎支原体抗体产生，但是阳性率不高；在50日龄时，C、A、E、B4个试验组阳性率明显上升，而D组及对照组阳性率为0；在80日龄时，各个试验组阳性率降低，A、C、E3个试验组阳性率仍维持在一个较高水平，而B、D试验组及F组抗体阳性率为0；在140日龄抗体阳性率明显上升，A、B、E、C、D抗体阳性率上升到较高水平，F组抗体阳性率上升较慢。
图1 试验组的猪肺炎支原体抗体阳性率的变化
Fig.1 The variety of M.hyo seropositive rate
3 讨论
对于猪肺炎支原体疫苗免疫效果的研究，仍是目前研究的热点问题。相关的研究指出，虽然使用猪肺炎支原体疫苗并不能阻止猪群感染该病原[78]，但使用疫苗后能有效减少支原体在呼吸道的定殖，也可以降低猪群的感染水平[6]。即疫苗虽不能阻止感染，但是能够减少群体中支原体感染的程度。同时，有学者发现免疫接种猪肺炎支原体疫苗能使商品猪提前出栏，减少临床症状及肺部损伤，降低治疗费用[79]。MeynsT等[10]也指出，使用猪肺炎支原体商品疫苗，对于高感染猪群感染率的降低并不明显，但能显著减少临床症状和肺部损伤。
在田间试验条件下，血清抗体变化主要发生在保育、育肥阶段[11]。本试验结果显示，在20日龄时，各疫苗组抗体水平差异不显著，而且抗体阳性率都比较低，说明在7日龄注射的疫苗还未能刺激机体产生较高浓度的抗体，这一试验结果与BereiterM等[12]报道的感染猪肺炎支原体后3周产生抗体相似。到了50日龄时，A、C两组产生的抗体水平极显著高于B、D组及对照组，E组极显著高于D组及对照组，B组显著高于D组及对照组，而此时阳性率也明显增加。A、C、E、B4种疫苗抗体水平显著高于对照组，说明第2次疫苗免疫接种刺激机体产生较高水平的抗体，同时也说明各种疫苗在刺激机体产生抗体方面有一定的差异。在80日龄时，各个试验组的抗体阳性率明显下降，但下降速度相当，抗体水平下降很可能与猪肺炎支原体疫苗产生的抗体半衰期有关。在140日龄时，抗体阳性率却明显上升，这与国外YagihashiT等[13]报道的在3 267头1月龄～6月龄生长育肥猪中，4月龄～6月龄血清阳性率陡然增加相符合；也与SilibaM等[6]在2007年报道的在两针免疫、一针免疫、对照组三个处理在育肥后期都产生较高抗体相符合。值得注意的是各个疫苗组的血清抗体阳性率都高于对照组。笔者推测，这一现象是与免疫记忆反应和4月龄～6月龄的环境中野毒刺激产生的免疫反应有关。
由于猪肺炎支原体商品疫苗不能显著降低高感染压力猪群的感染率[10]，故猪场要减少猪肺炎支原体的危害，除使用恰当的疫苗和合理的免疫程序外，还应当注重科学的管理和良好的饲养环境。同时有学者指出，该种病原可以通过垂直传播(母猪到小猪之间)及水平传播(仔猪之间)在猪群之间传播[14]，而全进全出是猪场控制猪肺炎支原体从大龄动物到小龄动物传播的一个重要途径[15]。另外，新购进的猪只应给予适当的隔离驯化时间，并注意猪群的饲养浓度。总之，注重结合管理、环境、疫苗等几要素，相信能够减少猪肺炎支原体引起的损失。
本研究证实，不同厂商生产的疫苗在刺激试验用动物产生抗体水平的高低上有一定差异，相对于对照组而言，绝大多数试验疫苗有显著差异；同时，20日龄时可检测到抗体，50日龄抗体水平达到一定高度，80日龄抗体水平显著下降，140日龄抗体水平显著上升。本试验不同日龄阶段的抗体水平变化规律可以为国内养殖场制定合理的猪肺炎支原体疫苗免疫程序提供参考，为进一步研究猪肺炎支原体疫苗的免疫效果提供了相关的资料。