蒲公英多糖对小鼠免疫器官的影响

摘　要：从蒲公英中提取多糖，观察其对小鼠免疫机能的影响。30只昆明种小鼠随机分成试验组和对照组，每组15只。试验持续10d，于试验第3天给试验组小鼠灌服制备的蒲公英多糖溶液，对照组小鼠则以生理盐水灌胃。试验结束后脱颈处死小鼠，剖检，取胸腺和脾脏分别称重，并取适当组织制备切片镜检。结果显示，蒲公英多糖能显著提高脾脏指数和胸腺指数，改善器官内部组织结构，促进小鼠免疫器官的生长发育，有利于提高小鼠的免疫功能。

关键词：蒲公英多糖；免疫器官指数；组织病理学；小鼠

蒲公英，别名黄花苗、婆婆丁、黄花地丁等，为菊科蒲公英属(Taraxacum mongolicumHand-Mazz)多年生草本植物的带根全草，《中华人民共和国药典》(2005年)记载其具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋等功效功能。现代药理研究显示，蒲公英具有广泛的药理活性，如抗病原微生物感染、提高机体免疫、保肝利胆、抗溃疡等，尤其是抗菌作用最为显著。试验发现由蒲公英组成的中药复方添加于患隐性乳房炎的奶牛饲料中，奶牛细胞免疫功能明显提高，隐性乳房炎发生率显著好转，有效率达83%[1-3]；金忠辉等[4]以蒲公英等五味药研制开发的复方蒲公英注射液对奶牛临床型和隐性乳房炎均具有较好的疗效；将蒲公英水浸液进行体外抑菌试验，对奶牛乳房炎主要病原菌均具有较强的抗菌活性[5-6]；将蒲公英提取物给小鼠口服，能提高小鼠的免疫功能[7]。但从总体上看，蒲公英应用多是散剂或汤剂，且以复方为主，没有形成现代中药剂型，因而作用成分复杂，难以推广使用。蒲公英中含甾醇类、胆碱、糖类、皂甙、果胶以及咖啡酸和绿原酸等多种成分[8]，但究竟是何种成分起抗菌作用尚不明确。目前认为咖啡酸和绿原酸是其抗菌活性成分[9]，并以此作为评价蒲公英药材的质量标准[10]，而对其中糖类活性的研究尚未有报道。本研究从蒲公英中提取多糖成分，观察其对小鼠免疫器官指数和免疫器官组织结构的影响，以研究蒲公英多糖的药理活性。

1　材料与方法

1.1　材料

实验动物为昆明白系小鼠，雌雄兼有，购自第四军医大学实验动物中心，体重20 g±4 g；蒲公英购自本地中医院，为蒙古蒲公英。

1.2　方法

1.2.1　蒲公英多糖制备　称取蒲公英500 g，粉碎后按1∶8比例加水，80 ℃热水提取两次，每次4 h，合并、浓缩提取液至500mL，按Sevag法去蛋白，分别用600 mL/L和800 mL/L乙醇沉淀两次，沉淀物干燥后得粗多糖。多糖试验前用生理盐水配制成10g/L浓度。

1.2.2　试验分组　30只小鼠随机分为试验组和对照组，每组15只，分笼饲养。试验共持续10 d，前3d为观察期，从第3天起每天下午定时给试验组小鼠灌胃蒲公英多糖溶液1mL，对照组小鼠灌胃等量生理盐水，试验第10天各组小鼠分别称重，脱颈椎处死，分别取脾脏和胸腺并称重，结果以免疫器官重量(mg)/体重(g)表示。另取各组小鼠脾脏和胸腺适当大小，保存于福尔马林溶液中，以制备组织切片，HE染色，光镜检查。

1.3　试验数据

以 ±SD表示，组间比较采用t检验。

2　结果

2.1　肉眼观察

肉眼观察免疫器官外观，各组脾脏、胸腺均颜色、形态正常，无可见病理变化。且试验组脾脏、胸腺与对照组比较，富有光泽，体积较大，可见明显变化。

2.2　蒲公英多糖对小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响

由表1可见，蒲公英多糖灌胃可显著提高试验小鼠脾脏指数和胸腺指数。

表1　蒲公英多糖对小鼠脾脏指数和胸腺指数的作用

Table 1　Effect ofTaraxacumpolysaccharides on spleen index and thymus index in mouse

Note： "*" means the difference is significant (P<0.05).

2.3　蒲公英多糖对小鼠脾脏和胸腺组织结构的影响

小鼠免疫器官切片在光镜下可见，试验组脾脏白髓、红髓分界明显，白髓面积增大，淋巴小节和脾小体增多，试验组胸腺则表现为白髓面积增大，胸腺小体数目增多。另外，各组小鼠免疫器官切片未见异常组织结构变化出现。

3　讨论

胸腺是机体重要的中枢免疫器官，是机体淋巴细胞分化和成熟的主要器官，而脾脏是机体最重要的外周淋巴器官。当淋巴细胞在胸腺中发育成熟后，经循环系统转移到脾脏以及各级淋巴组织和淋巴器官中定居，并最终发挥免疫作用。脾脏指数和胸腺指数是机体脾脏和胸腺发育程度的一个重要反映，给小鼠灌服蒲公英多糖溶液，能显著提高小鼠脾脏指数和胸腺指数，表明蒲公英多糖促进了小鼠脾脏和胸腺的生长发育，进而增强机体免疫功能。另外，从组织切片的变化中也能体现蒲公英多糖对小鼠免疫器官发育的促进作用，脾小体和胸腺小体被认为是淋巴细胞在脾脏和胸腺中的主要定居部位，在蒲公英多糖灌胃的小鼠，发现两者均数量增加。

多糖是生物体内普遍存在的一大类生物大分子，具有许多重要的生物活性，如参与细胞骨架的构成，也是多种内源性生物活性分子的组成成分[11]。近年来，从各种生物体内提取研究了大量生物活性多糖，发现其具有提高机体免疫力、抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、延缓衰老等一系列作用[12-16]，广泛应用于医药、食品和保健品等领域。研究显示蒲公英中含有丰富的糖类[17]，据报道蒲公英中糖占其干重30%～50%[18]，已发现的有葡萄糖、果糖、蔗糖、菊糖等[8]，但目前蒲公英中糖类成分药理活性的研究资料极其缺乏，阻碍其进一步的开发利用。本研究发现蒲公英多糖显著提高小鼠免疫器官指数，促进免疫器官发育，有利于增强机体免疫工能。本研究结果是对蒲公英药理作用的重要补充，为中药蒲公英的进一步推广利用提供理论依据。