摘 要：准确监测是防控口蹄疫的重要环节。采集某地区乡镇规模化养殖场及散养户的牛、羊、猪血清，采用正向间接血凝试验进行O型口蹄疫疫苗免疫抗体水平的检测。结果显示，该地区牛、羊的口蹄疫疫苗免疫合格率平均为76%，猪的口蹄疫疫苗免疫合格率平均为60%；规模化养殖场较个体散养户免疫效果好；牛口蹄疫O型灭活苗的免疫效果好于牛口蹄疫AsiaⅠ-O型双价灭活疫苗的免疫效果。
关键词：O型口蹄疫；抗体；正向间接血凝试验；检测
口蹄疫(Foot-and-mouthdisease，FMD)是一种急性、热性、高度接触性传染病。该病可快速和远距离传播，易感动物主要包括猪、牛、羊等主要畜种及其他家养和野生偶蹄动物。FMD也可感染人，但病例很少，表现轻微[1-2]。FMD的发病率为100%，病死率因毒株而异，严重时可达100%。由于口蹄疫对畜牧业的危害和对一个国家的政治、经济的影响，各国都积极采取了预防和控制该病的措施。口蹄疫有效控制的关键在于早期检测，准确的检测是防控口蹄疫的重要环节。本研采用正向间接血凝试验对家畜O型口蹄疫疫苗免疫抗体进行水平检测[3]。
1 材料与方法
1.1 器材
96孔110°V型医用血凝板，微型振荡器，移液器(50 μL、25μL)。
1.2 试剂
口蹄疫血凝抗原批号分别为051129，060524，070576；口蹄疫阴性对照血清，批号分别为050915,060225,070405；口蹄疫阳性对照血清，批号分别为050726,060223,070120；稀释液。均购自中国农业科学院兰州兽医研究所。
1.3 待测样品
对免疫接种后20 d～30 d的牛、羊颈静脉采血、猪耳缘静脉采血，无菌分离血清(每头约0.5 mL血清)置56 ℃水浴灭活30min。
1.4 方法
抗体检测按照中国农业科学院兰州兽医研究所《正向间接血凝试验监测口蹄疫抗体操作规程》进行。按照农业部于2006年2月14日下发《2006年高致病性禽流感和口蹄疫免疫方案(草案)》(农明字[2006]13号)规定，口蹄疫疫苗的畜群免疫抗体效价正向间接血凝试验检测结果≥1∶32(即5log2；第5孔呈现“＋＋”凝集)为免疫合格[4]。
2 结果
抗体检测结果见表1～表3。
表1 2005年秋季某地区各乡(镇)口蹄疫免疫抗体(O型)正向间接血凝试验检测结果统计
Table 1 The results ofFMDVantibody detected by indirecthemagglutination test in villages and towns of one district inautumn in 2005
动物 Animals | 类别 Items | 乡镇 Villages and towns | |||||
A | B | C | D | E | 合计 Total | ||
牛 Cattle | 监测数/头 Detection number | 30 | 29 | 30 | 10 | 29 | 128 |
合格/头 Qualified number | 26 | 28 | 24 | 9 | 28 | 115 | |
不合格/头 Unqualified number | 4 | 1 | 6 | 1 | 1 | 13 | |
合格率/% Qualifiedrate | 87 | 97 | 80 | 90 | 97 | 平均90 Average | |
羊 Sheep | 监测数/只 Detection number | 25 | 24 | 23 | 11 | 31 | 114 |
合格/只 Qualified number | 24 | 21 | 6 | 10 | 25 | 86 | |
不合格/只 Unqualified number | 1 | 3 | 17 | 1 | 6 | 28 | |
合格率/% Qualified rate | 96 | 88 | 27 | 91 | 81 | 平均77 Average | |
猪 Pigs | 监测数/头 Detection number | 11 | － | － | 7 | － | 18 |
合格/头 Qualified number | 0 | － | － | 6 | － | 6 | |
不合格/头 Unqualified number | 11 | － | － | 1 | － | 12 | |
合格率/% Qualifiedrate | 0 | － | － | 86 | － | 平均 43Average |
表2 2006年秋季某地区各乡(镇)口蹄疫免疫抗体(O型)正向间接血凝试验监测结果统计
Table 2 The results of FMDV antibody detected by indirecthemagglutination test in villages and towns of one district inautumn in 2006
动物 Animals | 类别 Items | 乡镇 Villagesand towns | ||||||
A | C | D | G | I | J | 合计 Total | ||
牛 Cattle | 监测数/头 Detection number | 31 | 29 | 30 | 30 | 30 | 31 | 211 |
合格/头 Qualified number | 25 | 20 | 16 | 22 | 18 | 27 | 151 | |
不合格/头 Unqualified number | 6 | 9 | 14 | 8 | 12 | 4 | 60 | |
合格率/% Qualified rate | 81 | 69 | 53 | 73 | 60 | 87 | 平均72 Average | |
羊 Sheep | 监测数/只 Detection number | 31 | 30 | 30 | 31 | 32 | 32 | 217 |
合格/只 Qualified number | 27 | 15 | 22 | 20 | 10 | 29 | 153 | |
不合格/只 Unqualified number | 4 | 15 | 8 | 11 | 22 | 3 | 64 | |
合格率/% Qualified rate | 87 | 50 | 73 | 65 | 31 | 91 | 平均 71Average | |
猪 Pigs | 监测数/头 Detection number | 11 | 10 | 11 | 11 | － | － | 53 |
合格/头 Qualified number | 1 | 0 | 8 | 4 | － | － | 14 | |
不合格/头 Unqualified number | 10 | 10 | 3 | 7 | － | － | 36 | |
合格率/% Qualified rate | 9 | 0 | 73 | 36 | － | － | 平均 26Average |
表3 2005年－2007年(春)某地区乡(镇)养殖场口蹄疫免疫抗体(O型)监测结果总计
Table 3 The results of immune antibody detected by indirecthemagglutination test in animal farms of one district in 2005－2007
动物 Animals | 类别 Item | 年份 Years | 合计 Total | ||
2005 | 2006 | 2007 | |||
牛 Cattle | 监测数/头 Detection number | 221 | 545 | 83 | 849 |
合格/头 Unqualified number | 199 | 397 | 53 | 649 | |
不合格/头 Qualified animals | 22 | 148 | 30 | 200 | |
合格率/% Qualified rate | 90 | 73 | 64 | 平均76 Average | |
羊 Sheep | 监测数/只 Detection number | 178 | 571 | 84 | 833 |
合格/只 Qualified number | 143 | 431 | 61 | 635 | |
不合格/只 Unqualified animals | 35 | 140 | 23 | 198 | |
合格率/% Qualifiedrate | 80 | 76 | 73 | 平均76 Average | |
猪 Pigs | 监测数/头Detection number | 28 | 115 | 25 | 168 |
合格/头 Qualified number | 16 | 72 | 12 | 100 | |
不合格/头 Unqualified animals | 12 | 43 | 13 | 68 | |
合格率/% Qualified rate | 57 | 63 | 48 | 平均60 Average |
3 讨论
新疆某地区乡(镇)3年来共检测牛血清849份，免疫合格率平均为76%(649/849)；检测羊血清833份，免疫合格率平均为76%(635/833)；检测猪血清168份，免疫合格率平均为60%(100/168)。各个乡镇的免疫合格率差异较大，其合格率无规律性，这可能与各乡镇技术人员业务素质的差别有关。同时数据显示了该地区牛、羊口蹄疫免疫效果基本合格，猪的口蹄疫免疫合格率较低。这种情况的出现可能是由于给猪进行免疫注射时操作不便利，使得在操作中采取了打“飞针”的注射方式而影响了注射剂量和注射的准确性，影响了猪的免疫抗体的产生[5-6]。
由表1和表2可知，2005年A、D乡(镇)养殖户(场)羊的口蹄疫免疫合格率分别为96%和91%。2006年J乡(镇)养殖户(场)羊的口蹄疫免疫合格率为91%。这些数据均来源于规模化养殖场，免疫合格率较高。2005年C乡(镇)养殖户(场)羊的口蹄疫免疫合格率为27%。2006年I乡(镇)养殖户(场)羊的口蹄疫免疫合格率分别为31%。这些数据则均来自于个体养殖户，免疫合格率较低。表明规模化养殖场与个体散养户相比较，其防疫意识较强、防疫注射程序较合格，因而免疫效果也较好[7]。
该地区在2005年之前使用的是口蹄疫O型灭活疫苗，2006年之后使用的是口蹄疫AsiaⅠ-O型双价灭活疫苗。检测结果表明，牛、羊口蹄疫疫苗免疫合格率呈递减趋势，基本体现了O型口蹄疫灭活疫苗的免疫效果好于口蹄疫AsiaⅠ-O型双价灭活疫苗的免疫效果[8-10]。
世界动物卫生组织(OIE)推荐用液相阻断ELISA监测口蹄疫抗体，而我国目前应用最广的是部颁标准中规定的正向间接血凝试验，该法简便、快速、特异性高，但敏感性和稳定性不太理想，肉眼判定结果会出现主观因素的误差，需采取部分样品用液相阻断ELISA做进一步的验证，以弥补不足[10]。