为全面了解免疫器官、淋巴细胞和细胞因子在雏鸭病毒性肝炎和传染性浆膜炎的发病过程中的保护作用，试验以鸭肝炎病毒(DVHV)和鸭疫里默杆菌(RA)分别感染缙云麻鸭和绍兴鸭，在不同感染期检测免疫器官指数、T淋巴细胞数与细胞因子水平的动态变化规律，探讨这些免疫指标与疾病发展的相关性，并比较缙云麻鸭和绍兴鸭的差异，为深入探讨鸭病毒性肝炎和传染性浆膜炎的免疫发病及免疫机理提供试验依据。
1、材料与方法
1．1试验鸭
健康绍兴鸭与缙云麻鸭公雏，1日龄，浙江五莲禽蛋公司提供。
1．2病原
鸭肝炎病毒(DVHV)与鸭疫里默杆菌(RA)，由浙江省农业科学院禽病组提供。
1．3攻毒感染方法
1日龄新出壳雏鸭，适应性饲养3d后，随机平均分为A、B、C3组，缙云麻鸭每组20只，绍兴鸭每组12只。A组攻击感染RA，感染途径为背部皮下注射与滴鼻接种，每只接种细菌培养物总量为0．5mL；B组攻击感染DVHV，感染途径为背部肌肉注射，每只接种毒株稀释液0．3mL；C组为健康对照组。试验期为7d，期间时刻观察、记录各组鸭发病的
数量与临床症状。当病鸭死亡时：(1)准确记录死亡时间。(2)称量体重。(3)断颈采集血液2份，一份抗凝，用于外周血T淋巴细胞的检测；另一份分离血清，用于检测细胞因子水平。(4)剖检组织器官病理变化。(5)进行免疫器官指数的测定。对照组分别于3日龄和10f3龄采集血液并进行免疫器官指数的测定。
1．4免疫器官指数的测定
参考方静、韩爱云等的方法，空腹称重，颈部放血屠宰后完整取下法氏囊、脾脏和胸腺，剔除脂肪准确称重，记录绝对重量(湿重)，并计算胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数，计算公式为免疫器官指数=免疫器官湿重(mg)／体重(g)。
1．5血清细胞因子水平的测定
参考仝宗喜等的方法，颈静脉采集血液，分离血清，分别采用放射免疫法和酶联免疫吸附法测定白细胞介素一2(IL一2)和一干扰素(IFN～)的水平(由北京华英生物技术研究所检测)。
1．6外周血T淋巴细胞的测定
参考刘玉斌等的方法，采用T淋巴细胞酸I生d一醋酸萘酯酶测定法。
1．7数据处理和统计分析
采用SPSS12．0软件进行脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数、T淋巴细胞、IL一2和IFN一等各项免疫指标与试验鸭攻毒后的死亡时间之间的相关性分析和回归分析。试验数据以平均数±标准差表示，百分数经ARCSIN转换。
2、结果
2．1缙云麻鸭感染鸭RA试验
缙云麻鸭雏鸭感染RA后的死亡时间与死亡时的免疫器官指数、淋巴细胞ANAE阳性率及细胞因子水平的相关系数()、P值和一元线性回归方程见缙云麻鸭雏鸭感染RA后的死亡时间与死亡时的脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数、淋巴细胞ANAE阳性率及IFN一水平均呈正相关，在仅=0．01(或0．1)水平下线性关系显著，但与IL一2水平呈负相关(P<0．1)。
2．2缙云麻鸭感染DVHV试验
缙云麻鸭雏鸭感染DVHV后的死亡时间与死亡时的免疫器官指数、淋巴细胞ANAE阳性率及细胞因子水平的相关系数()、P值和一元线性回归方程缙云麻鸭感染DVHV后的死亡时间与免疫指标的相关性由表2可见，缙云麻鸭雏鸭感染DVHV后的死亡时间与死亡时的脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数、淋巴细胞ANAE阳性率及IFN～水平均呈正相关，在Of．=0．1水平下线性关系显著或不显著，但与IL一2水平呈负相关(P>0．1)。
2．3绍兴鸭感染RA试验
绍兴鸭雏鸭感染RA后的死亡时间与死亡时的免疫器官指数、淋巴细胞ANAE阳性率及细胞因子水平的相关系数()、P值和一元线性回归方程见
绍兴鸭感染RA后的死亡时间与免疫指标的相关性与死亡时的脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数虽然呈正相关，但在仅=0．1水平下线性关系不显著；与淋巴细胞ANAE阳性率及IFN一水平也呈正相关，且在仅=0．01水平下线性关系显著，但与IL一2水平呈负相关(P>0．1)。
2．4绍兴鸭感染DVHV试验
绍兴鸭雏鸭感染DVHV后的死亡时间与死亡时的免疫器官指数、淋巴细胞ANAE阳性率及细胞因子水平的相关系数()、P值和一元线性回归方程见绍兴鸭感染DVHV后的死亡时间与免疫指标的相关性可见，绍兴鸭雏鸭感染DVHV后的死亡时间与死亡时的脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数、淋巴细胞ANAE阳性率、IL一2水平及IFN一水平均呈正相关，除胸腺指数(P>0．1)外，在仅=0．1水平下线性关系均显著。
2．5缙云麻鸭与绍兴鸭对照组试验
缙云麻鸭与绍兴鸭对照组在3日龄和10日龄的免疫器官指数、淋巴细胞ANAE阳性率与细胞因子
经数据统计分析可以看出，尽管10日龄缙云麻鸭与绍兴鸭的各项免疫指标总体上均比3日龄时有所升高，但差异不明显(P>O．1)；3日龄与10日龄缙云麻鸭的IFN一水平均高于绍兴鸭(P<Q1或P<0．01)，而绍兴鸭的IL一2水平均高于缙云麻鸭(P<0．1或P>O。1)。
3、讨论
3．1细胞免疫与疾病发生发展的相关性
淋巴细胞是体内重要的免疫活性细胞，其中的T淋巴细胞在细胞免疫中起着重要的作用。细胞因子是由免疫细胞产生的具有免疫调节和效应功能的蛋白介质。研究发现，不同动物患传染病时外周血淋巴细胞与细胞因子的动态变化与疾病发展过程的相关性不同。刘爵等研究发现，T淋巴细胞参与IBDV超强毒的免疫致病过程；冯军等报道DHV攻毒后的鸭外周血T淋巴细胞ANAE阳性率明显增高；JiangR等认为1h1细胞因子与肝炎活动呈正相关；SzkaradkiewlczA等发现急性自限性乙型肝炎患儿以Thl型反应占优势，表现为IFN一7和IL一2生成增加；杨炼等认为TN—ot表达与乙型肝炎病毒(HBV)感染和免疫损伤密切相关；李华等。。与郑洁等¨发现仔猪感染繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)BJ一4株后TNF—ot水平明显上升，外周血单核细胞产生Thl型细胞因子IL一2的能力增强；然而，刘忠贵等发现1日龄雏鸡感染传染性贫血病毒(CIAV)后胸腺和脾脏T细胞IL一2、IFN的活性明显降低，而且细胞免疫中枢胸腺、体液免疫中枢法氏囊和外周免疫器官脾脏的T细胞和／或B细胞的增殖反应均明显减弱。
3．2细胞免疫对疾病发生发展的双面性
T淋巴细胞是抗病毒感染中的一个重要环节，IL一2和IFN一是机体免疫网络中最重要的调节因子。然而，免疫细胞与细胞因子对感染的免疫应答是一把双刃箭，一方面在抗细菌、病毒和寄生虫感染方面发挥着重要作用；另一方面又损伤正常组织细胞，起致炎作用，形成组织细胞损害的连锁反应。如LoembaHD等和MolitorTW等研究表明，仔猪对PRRS病毒的感染一方面通过免疫反应产生对PRRS病毒的抵抗力，另一方面可造成机体免疫系统的损伤，引起免疫抑制，增加机体对继发感染的易感性。JiangR等H和SzkaradkiewiczA等发现在急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎的急性活动期，Thl型细胞因子如IL一2、IF一12、IFN一7等的产生增多，细胞免疫加强，虽有利于机体清除病毒，但也加重了肝脏的炎症反应。因此，免疫细胞与细胞因子在机体的炎症反应和免疫应答过程中起着关键而又矛盾的作用。全面了解免疫细胞与细胞因子的免疫调节作用和传染病发展过程的相关J眭，对于制订合理的免疫程序和选择适宜的抗病指标都具有重要意义。本试验检测雏鸭感染DVHV、RA后的死亡时间和死亡时的免疫器官指数、外周血淋巴细胞ANAE阳性率及细胞因子的变化与相关性，更能够正确反映这些免疫指标对机体免疫系统的免疫保护作用和损伤反应。