摘要：河南某猪场突然发生一种具有高热、跛行、明显神经症状，耳、四肢、腹下皮肤发绀，有出血点和出血斑，发病快、病程短、死亡率高的传染病。根据流行病学调查、临床症状和病理剖解变化及实验室诊断综合分析，确诊为猪瘟和链球菌病混合感染。
关键词：猪瘟；猪链球菌；诊断
中图分类号：S858．28 文献标识码：B 文章编号：1671-7236(2007)04-0119-02
猪瘟是一种急性、热性和高度接触性传染病，是危害我国养猪最重要的疾病之一，猪瘟的发生往往继发或混合感染一种或几种细菌性、病毒性和寄生虫性疾病，如猪瘟伴发大肠杆菌病、猪瘟并发链球菌病、猪瘟与猪弓形体病、猪瘟与猪丹毒的混合感染。这种混合感染或继发感染的诊断和治疗十分困难，使用抗生素类药物治疗效果不明显，至今没有理想的治疗药物，因此需要高度重视，定期检疫、免疫，预防此类疾病的发生，减少其给养猪业带来的巨大危害。
1、材料与方法
1.1 材料 病料采自河南某猪场病死仔猪，包括心、肝、脾、肺、肾和淋巴结等器官，同龄病猪血清5份。试验动物：18～20 g小白鼠，1.5 kg体重的家兔(购于河南农业大学实验动物中心)。马丁肉汤、马丁营养琼脂平板、全血琼脂平板和各生化糖发酵试验管均由本实验室制备。猪瘟病毒诊断试剂盒由华中农业大学提供，生产批号200501。药敏纸片购于北京天坛药物生物技术开发公司。
1.2 方法
1.2.1涂片镜检 取病死猪的心血、肝脏、脾脏涂片，革兰氏染色镜检。
1.2.2病原体的分离培养 参考闫瑞凤(2004)的方法，采取病死猪的肝脏、脾脏、血液接种于马丁肉汤，24 h后，涂布画线马丁营养琼脂培养基和全血培养基，于37℃条件下培养24 h，再挑取单个菌落进行纯培养。
1.2.3 菌体形态观察 将纯培养物涂片，革兰氏染色，显微镜下观察菌体形态。
1.2.4 生化试验 取纯培养物，分别将其接种于各种生化培养基内，37℃培养24 h观察记录变化。
1.2.5 动物接种试验 无菌操作剪取小块肝、脾病料置无菌研钵中研磨，用生理盐水10倍稀释，纱布过滤，腹腔接种2只小白鼠，剂量0．2 ml／只，观察结果。
1.2.6 药敏试验 应用纸片法(韩文瑜等，1992)，对该菌进行药物敏感性试验。
1.2.7 兔体交互免疫试验 将病死猪脾组织制成经抗生素处理的10倍稀释的脾乳剂5 ml，肌注于试验组的2只兔，7 d后再用猪瘟兔化弱毒苗静脉注射，每隔6 h测体温1次，连续3 d，观察结果。
1.2.8 ELlSA试验 操作步骤按猪瘟病毒试剂盒说明进行。具体与徐镔蕊等(2004)所做的猪瘟病毒检测方法一致。
2 、 结果
2.1 流行病学、症状、病变 该猪场为新建猪场，没有完善的防疫措施,场内的技术人员也缺少经验,开放式管理,人员出入自由未经消毒,仔猪20日龄首免,60日龄加强免疫,突然发病,急性者突然死亡。患猪流浆液性鼻涕，耳下、腹下、四肢末端、股内侧有紫红色或蓝紫色出血斑。3d内有10头猪发病，病猪精神沉郁，食欲减退或废绝，体温升高到40.5~42.0℃,呆立不动或伏卧不起。喜欢扎堆，有的病猪出现神经症状，如转圈、磨牙、后肢麻痹，前肢爬行，少数病猪后期呼吸困难，口鼻流白色或血色泡沫。使用青霉素、链霉素等抗生素进行治疗后，病猪体温有所降低，但发病后2~3d死亡，其他猪也相继出现死亡。送检的病死猪，可见被毛粗乱，消瘦，眼角有脓性分泌物，尾根和肛门附近被粪便污染，全身黏膜、浆膜、淋巴结及内脏器官有不同程度的出血、充血；淋巴结肿大，呈蓝紫色或暗红色，切面为红白相间的大理石状外观；小肠膨胀，黏膜充血，内积有腥臭黄白色内容物；膀胱黏膜有出血斑点或弥漫性出血；肝肿大，脾的边缘或尖端有出血性梗死灶；肾脏肿大，有散在出血点；肺充血、出血；喉头出血；心冠状沟、心内膜都有出血斑点。
2.2 实验室诊断
2.2.1涂片镜检 肝脏、脾脏、心血涂片上均发现成对或单个存在的呈链状排列的革兰氏阳性球菌。
2.2.2培养特性 各种病料接种在普通营养琼脂平板上，生长不良。接种在全血琼脂平板上，菌落小的呈无色透明，大的略呈淡灰色。菌落出现明显透明的溶血环。普通肉汤培养24h呈均匀浑浊，管底有少量絮状沉淀，不形成菌膜或菌环，继续培养1d后，菌体下沉，肉汤变清朗。
2.2.3 菌体形态特征 镜检可见该菌为革兰氏阳性球菌，菌体多呈单个、双球形及长链排列。
2.2.4 菌体生化特性的鉴定 37℃培养24 h，菌体生化特性结果见表1。
2.2.5动物接种 试验 2只小白鼠均于24～48 h死亡。剖检后取肝、脾涂片，革兰氏染色镜检，均见到与死猪病料涂片一致的革兰氏阳性、成对或短链球菌。
2.2.5药敏试验 药敏试验结果见表2。
表1 生化特性结果
项目 乳糖 葡萄糖 果糖 蔗糖 鼠李糖 麦芽糖 甘露醇 山梨醇 阿拉伯糖 VP MR 明胶液化
结果 + + + — — — 阴性 阴性 阴性
注：表示产酸产气，+表示产酸不产气，—表示不产酸也不产气。
表2 药敏实验结果（mm）
名称 庆大霉素 卡那霉素 痢特灵 环丙沙星 氧氟沙星 青霉素 链霉素 氟哌酸
抑菌圈直径 25 23 17 16 16 8 7 5
2.2.6兔体交互免疫试验 结果试验组体温正常，对照组出现定性热反应。试验证明是猪瘟。
2.2.7 ELISA结果判定 变为蓝色的记为“+”表示阳性，而无色或不清楚的记为“一”表示阴性。结果均变为蓝色，和猪瘟对照组颜色基本一致。试验证明是猪瘟。
3 、小结与讨论
根据流行病学调查、临床症状、病理剖解变化及实验室诊断等综合分析，确诊为猪瘟与链球菌的混合感染。
据报道(孟晓芹等，1998)，链球菌在鲜血琼脂平板上生长，根据其在血液琼脂平板上溶血的现象，可分为α、β、γ 3种类型溶血链球菌。根据上述标准，结合该链球菌对红细胞的作用结果可判断为β型溶血链球菌。根据药敏试验结果可见，该分离菌对庆大霉素、卡那霉素高度敏感；对青霉素、氟哌酸已产生了较强的耐药性。这与现在青霉素的滥用有很大关系。随着抗菌药物在临床上的普遍应用，以及使用不规范和使用方法不当，使得抗生素抗药菌株不断出现，如未能按照药敏试验结果来指导临床用药，极易用药不当，还会错过最佳治疗时机，造成一定的经济损失。因此，当发生疫病时，在条件允许的情况下，一定要进行药敏试验，根据试验结果选择最佳药物进行治疗。
猪瘟与链球菌混合感染多表现为急性，发病快、病程短、死亡率高，一旦发病，将带来很大的经济损失，因此，规模化猪场必须建立健全兽医卫生防疫制度，严格控制、监督执行。预防接种不是万能的，一定要结合搞好环境卫生、严格消毒、药物预防等综合防治措施，才能避免疫病的侵入。
目前，规模化猪场的疾病情况日趋复杂，往往是2种或2种以上的疾病同时感染，作为猪场的经营管理者，必须了解国内外疫情的流行动态及发展趋势，掌握新的防治措施，才能做到防病于未然。
