一、急性毒性试验
根据供试药物临床应用的给药途径不同，本试验可分为：
(一)经口或注射给药的急性毒性试验
1、动物
选用小鼠(体重18—22g)、大鼠(180—200g)或其他敏感动物。应注明动物品系。每组小鼠不少于10只，大鼠不少于6只，雌雄各半，雌性应未产无孕。
2、供试药物的配制
一般用水为溶剂，将药物配制成一定浓度的溶液。若选择其他溶剂或助溶剂，一般要求LD50>15000mg／kg。
3、给药方式与最大体积
经口急性试验宜用灌胃法，一次剂量直接灌入，给药前需禁食4—8小时，但不限制饮水。一次最大灌胃量，小鼠不超过1.0ml／只，大鼠不超过4.0ml／只。若灌胃量太大，可在24小时分成2—3次给药，但合并作为一日剂量计算。经注射急性毒性试验多采用腹腔注射，一次最大注射量，小鼠不超过1ml，大鼠不超过3ml。
4、剂量与分组
在正式试验前，首先用少量动物做预备试验，确定受试动物全部致死的最小剂量和全部不致死的最大剂量，正式试验一般分为5—7个剂量组。组间剂量呈等比级数，其比值为1.2—1.4。
5、观察指标
观察动物一般健康状况，中毒表现和死亡过程。观察时间一般为一周。对死亡动物应作大体剖检，必要时进行病理组织学检查。
6、LD50计算
采用寇氏或机率单位对数图解法计算供试药的LD50。值及其95％可信限范围。
7、结果评定
大鼠一次经口LD50在1m矽kg以下者为极毒，1—50mg／kg为剧毒，50—500mg／kg为中等毒，500—5000mg／kg为低毒，5000mg／kg以上者为实际无毒。
(二)经皮给药的急性毒性试验
1、动物
选用健康家兔(2.0—3.0kg)、豚鼠(350—450g)或大鼠(200—300g)。每组动物不少于6只，雌雄各半。
2、供试药物的配制
供试药物如是固体，应磨成细粉状，过120目筛，并用适量水或无毒无刺激性赋形剂(橄榄油、羊毛脂、凡士林等)混匀。如为液体，一般不要稀释。
3、给药方式
脱去动物背部脊柱两侧毛发(不得损伤皮肤)，脱毛后24小时检查皮肤，如无损伤才能进行试验。将供试药物均匀地涂敷于脱毛区，不应少于动物体表面积的10％，用塑料纸和两层纱布覆盖，再用胶布或绷带固定，以防脱落和动物舔食。敷药24小时。试验结束后，用温水或适当溶剂清除残留供试药。大鼠可采用浸尾方法给药。
4、剂量与分组
正式试验前，用少量动物做预备试验，根据24小时内动物死亡情况，估计LD50的可能范围，以确定正式试验的剂量。一般分为4个剂量组，组间剂量呈等比级数。其比值为：1.5—3.0。若用赋形剂，需设赋形剂对照组。
5、观察指标
注意观察动物的全身中毒表现和死亡情况。观察时间为一周。若给药4天后仍有动物死亡时，仍需继续观察一周，对死亡动物应作大体剖检，必要时进行病理组织学检查。
6、结果评定
兔涂皮LD50在5mg/kg以下者为极毒，5—44mg/kg为剧毒，44—350mg/kg为中等毒，350—2180mg/kg为低毒，2180mg/kg以上者为无毒。
二、亚慢性毒性试验
1、动物
一般选用大鼠(100—200g)或小鼠(15—20g)。有条件时，采用供试药物的靶动物鸡等。外购动物需饲养一周后才能供试验用。
2、试验周期
根据临床或生产实际用药时间决定试验周期。临床用药期1—3天时，毒性试验给药期为14天；临床用药期7天时毒性试验给药期为28天；临床用药期30天时，毒性试验给药期为90天，临床用药期30天以上时毒性试验给药期为6个月。
3、给药方式
如试验周期短(14天)，应与临床应用的给药途径相同，内服时，大、小鼠用灌胃法，鸡用药丸投予。给药周期28天以上时，则将药物混于饲料中，让其自由采食(应确保给药量不影响动物正常的营养需要)，饮水不限。
4、剂量与分组
至少三个剂量组和一个对照组，大鼠每剂量组至少20只，雌雄各半。高剂量组应有部分动物出现毒性反应或死亡(死亡数不超过20％)，低剂量组应高于药物对动物的有效量，原则上应不出现任何毒性反应。
5、观察指标
(1)每天观察一般健康状况，包括活动、采食、饮水、发病和死亡情况。
(2)每周分别称体重、饲料消耗量2—3次，计算增重、平均摄食量及饲料利用率。
(3)定期作血液学检查：包括血色素含量、红细胞数、白细胞数及其分类计数、血小板数、网织红细胞数等。
(4)定期有选择地作血液生化学检查：包括谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、血中尿素氮、非蛋白氮及肌酐含量，血清中白蛋白／球蛋白等。
(5)试验结束时测定肝、肾及其他脏器的绝对重量和脏器系数。
(6)试验结束时对所有动物(包括试验过程中死亡的动物)进行剖检，有选择地进行肝、，肾、脾、胃肠等器官的组织病理学检查。在试验过程中，根据试验周期的长短，定期处死少量动物进行剖检与组织病理学检查。
6、结果处理
将试验数据汇总成表，病理变化摄成照片，用方差分析或X2统计处理，P<0.05及具有剂量-反应关系的，显示毒性较强。根据中毒时首先出现的症状及停药后组织和功能损害的发展和恢复情况，写出评价报告。