1、用仪器观察 把安在光学仪器尖端的小玻璃管，从小鸡肛门插入直肠内，通过肠壁来观察卵巢和睾丸，公鸡左右侧各有1个睾丸，呈黄色，形似香蕉；母鸡只在左侧有1个卵巢，三角形，呈桃红色，右侧卵巢退化。用这个方法同样要求熟练，否则会弄破肠壁影响鸡的健康成长，熟练后鉴别速度也较快，每6分钟可鉴别100只左右。
2、看肛门张缩 将出壳小鸡握在手中，使肛门朝上，吹开肛门周围的绒毛，用左右手拇指拨动肛门外壁，观察小鸡肛门张缩情况。拨动时如果肛门闪动快而有力，就是公鸡；如果闪动一阵停一会，再闪动一阵，张缩次数少而慢，同时容易将肛门翻开，就是母鸡。
3、翻肛门看生殖突起 先轻轻地握住刚出壳的小鸡，排掉它的粪便，再翻开肛门的排泄口，观察生殖突起的发达程度和状态。观察时主要是以生殖突起的有无和隆起的特征进行鉴别。
公鸡的生殖突起（即阴茎）位于泄殖腔下端八字皱襞的中央，是一个小圆点，直径0.3-1毫米左右，一般0.5毫米，且充实有光泽，轮廓明显。母鸡的生殖突起退化无突起点，或有少许残余，明显正常型的呈凹陷状。少数母鸡的小突起不规则或有大突起，但不充实，突起下有凹陷，八字皱襞不发达。有些公鸡的突起肥厚，与八字皱襞连成一片，并比较发达。
这个方法最好是用来鉴别出壳12-24小时内的小鸡。因为此时公母鸡生殖突起差异最明显，以后随着时间的推移，突起就会逐渐萎缩而陷入泄殖腔的深处，不容易鉴别。
