取病死禽的肝、脾、组织液、心血、卵黄囊等病料，涂片，用美蓝或瑞氏染色法染色，镜检，可见蓝、紫或革兰氏阳性的单个、成对或短链排列的球菌，不形成芽胞，可做诊断。
分离培养：将病料接种于鲜血琼脂平板上，37℃和pH7.4～7.6，培养24～48小时后，长出无色透明、圆形、光滑、隆起的露滴头小菌落。C群兽疫链球菌产生β型溶血；D群链球菌呈α型溶血或不溶血。培养物中细菌涂片、染色、镜检，呈双球菌状或呈短链，菌体周围有荚膜。血清肉汤培养基中，多数管底呈绒毛状或呈颗粒状沉淀物生长，上清液清亮。
生化试验：可发酵甘露醇、山梨醇和L－阿拉伯糖（系指禽源链球菌）。
