取病鸡眼分泌物分别无菌接种于营养琼脂和麦康凯培养基上。37℃培养24小时后，在营养琼脂上生长出表面稍隆起，光滑、湿润、灰白色半透明圆形菌落。
在麦康凯培养基上生长出边缘整齐或波状、稍起，表面光滑、湿润、粉红色或深红色的圆形黏性菌落。将菌落移接于伊红——美兰琼脂上呈黑色，有金属光泽，镜检为两端钝圆，革兰氏阴性的短小杆菌。
生化实验
能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖并产酸产气，能产生靛基质。不发酵蔗糖和卫茅醇。甲基红试验阳性。
药敏试验
庆大霉素、氟哌酸高敏；卡那霉素中敏；青霉素、链霉素、土霉素具有耐药性。根据鸡群的发病情况、症状、剖检变化及实验室诊断，确诊该鸡场发生的是大肠杆菌性眼炎。
