畜禽传染病一直是危害畜牧业发展的首要问题，尤其是病毒性传染病，迄今尚无有效的治疗方法，疫苗预防仍是最重要的措施。由于种种原因，多数疫苗只有与免疫增强剂配合使用才能发挥良好的防疫效果。但是，目前国内外广泛使用的油乳类、铝胶类等化学性免疫增强剂常有副作用大、局部刺激强、致癌、制备和使用麻烦或不能足够提高弱抗原的免疫原性等弊端。因此，研制高效、低毒的新型免疫增强剂已成为亟待解决的问题。研究表明，许多中药成分具有免疫增强作用，作为免疫增强剂具有显著的优势。本研究选择9种中药成分为研究对象，系统研究了它们的免疫增强作用和机理，筛选出作用较好的中药成分和组方，初步完成了新型免疫增强剂的研制，并对其部分作用机理进行了研究。试验分为以下九个部分：
试验Ⅰ、中药成分的制备 选择文献报道增强免疫作用较好的当归多糖（CAPS）、黄芪多糖（APS）、板蓝根多糖（IRPS）、淫羊藿多糖（EPS）、蜂胶多糖（PPS）、淫羊藿黄酮（EF）、蜂胶黄酮（PF）、黄芪皂苷（AS）和人参皂苷（GS）等9种中药成分为研究对象。GS直接购自市场，5种多糖、淫羊藿黄酮、蜂胶黄酮和黄芪皂苷分别采用水煎醇沉法、聚酰胺柱层析法、酸碱沉淀法和大孔吸附树脂柱层析法提取；5种多糖、2种黄酮和2种皂苷的含量测定分别采用硫酸蒽酮法、芦丁法和TLC分光光度法。从而为整个研究打好基础。
试验Ⅱ、中药成分的体外筛选试验 为了筛选增强免疫作用较好的单味中药成分，将4种浓度的CAPS、APS、IRPS、EPS、PPS、EF、PF、AS和GS 等9种中药成分分别加入到培养的鸡脾脏淋巴细胞中，培养48h后，用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果表明，9种中药成分均能促进淋巴细胞增殖，其中APS、EPS、GS和AS等在一定浓度既能单独又能协同ConA或LPS刺激淋巴细胞增殖，以EPS和APS的作用最强。然后根据浓度试验结果，选出各药的适宜浓度，进一步比较它们作用的差异，发现EPS和GS效果最好。
试验Ⅲ、中药成分的体内筛选试验 为了验证体外试验结果和筛选免疫增强作用较好的中药成分，380只11日龄雏鸡，随机均分为19组，试验组分别肌肉注射高、低剂量的9种中药成分，对照组注射同量生理盐水，每天1次，连续3天；14日龄用新城疫Ⅳ系弱毒疫苗首免，28日龄二免。分别在35、42、49和56日龄心脏采血、测定T淋巴细胞增殖的动态变化。结果表明，所有中药成分均能显著促进T淋巴细胞增殖，并有一定的量效和时效关系，其中以IRPS高剂量、PF高剂量和GS低剂量的效果较好，APS高剂量、EPS高低剂量、PPS高剂量、EF高剂量、AS高低剂量和GS高剂量次之。结合体外试验及以前的研究结果可以筛选出CAPS、APS、EPS、IRPS、PF和GS作为新型免疫增强剂的候选药。
试验Ⅳ、中药成分与白介素-2免疫协同作用的比较 为了研究中药成分和白介素-2（IL-2）的免疫协同作用，选择420羽罗曼雏鸡随机均分为14组，14日龄时用新城疫Ⅳ系苗免疫，试验组并开始分别肌肉注射6种中药成分和IL-2，每天1次，连用3天。分别于免疫后第7、14、21和28天每组随机抽取10羽采血检测血清ND-HI抗体效价，免疫后2、4和6周时每组随机抽取5羽称取体重、脾脏和法氏囊的重量，计算免疫器官指数。结果表明，APS、IRPS、GS、EPS和PF与IL-2合用在7～14天能显著提高抗体效价，APS、IRPS和EPS与IL-2合用在免疫后4周显著提高免疫器官指数，CAPS单独即能显著提高抗体效价。结合以前的相关研究选择APS、CAPS、EPS、PF和GS 5种中药成分作为新型免疫增强剂的候选药。
试验Ⅴ、复方中药成分的免疫增强作用及其与白介素-2免疫协同作用的比较 为了比较中药成分不同组合的免疫增强作用及其与白介素-2（IL-2）的免疫协同作用。将CAPS、APS、EPS、PF和GS等5种中药成分分别两两组合成多个复方，单独或与IL-2配合注射13日龄雏鸡，连续3天，在末次注射同时用ND-Ⅳ系苗免疫，然后分别在免疫后第7、14、21、28天每组随机翼下静脉采血10只，检测ND-HI抗体效价。结果表明，复方中药成分增强免疫的作用强于单味中药成分，以PF-EPS和GS-APS的作用较好，可以作为新型免疫增强剂的候选方；而复方中药成分和IL-2合用的免疫协同作用不明显。
试验Ⅵ、复方中药成分增强免疫的效果验证及其量效关系的比较 为了验证2个复方中药成分的免疫增强作用及其量效关系，试验1将2个复方分3种剂量配合ND疫苗免疫雏鸡，以另2个中药成分复方（方3，2味组合；方4，3味组合）和无佐剂苗为对照，监测血清ND-HI抗体效价的动态变化。试验2将2个复方的3个剂量分别降低2倍配合ND灭活苗免疫雏鸡，以油佐剂苗及蜂胶佐剂苗为对照，测定血清中ND-HI抗体效价和免疫器官指数的动态变化。结果证实，方1和方2的效果确实，方1中剂量、方2低剂量的效果最好。方1中剂量与油佐剂的效果相当，优于蜂胶佐剂。
试验Ⅶ、复方中药成分的增强免疫作用及机理的研究 为了进一步证实2个复方的免疫增强作用及其最佳剂量，并探讨其作用机理，将上一试验使用的2个复方的3个剂量再分别降低2倍，与新城疫疫苗病毒混合制成中药佐剂苗免疫雏鸡，以无佐剂苗和油佐剂苗为对照，于免疫后第7、14、21、28、35、42d采血，分别用MTT法和微量法测定外周血T淋巴细胞增殖和血清ND-HI抗体效价的动态变化；同时测定2个复方对培养的鸡脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明，2个复方均能显著促进外周血T淋巴细胞增殖、提高血清ND-HI抗体效价，在多数时间点的效果与油佐剂的效果相当，以方1高剂量、方2中剂量的效果最好，在某些时间点显著强于油佐剂；2个复方在一定的浓度显著促进脾淋巴细胞增殖。
试验Ⅷ、复方中药成分对鸡外周血T淋巴细胞中IL-2 mRNA表达的影响 为了研究2个复方中药成分增强免疫的机理，用Primer Premier软件设计了一对白介素-2（interleukin-2，IL-2）引物。从ConA刺激的鸡外周血淋巴细胞提取总RNA，采用RT-PCR技术扩增出片段约为469bp的IL-2基因片段，并对其进行了酶切鉴定和测序。采用半定量RT-PCR方法测定了2个复方中药成分对鸡外周血T淋巴细胞中IL-2 mRNA表达的影响。结果表明，方1的3个剂量和方2的高剂量均能提高淋巴细胞中IL-2 mRNA的表达，以方1高剂量效果最好。这一结果，也为复方中药成分与IL-2合用免疫协同作用不明显找到了答案。
试验Ⅸ、复方中药成分对鸡外周血T淋巴细胞中IFN-γ mRNA表达的影响 为了研究2个复方中药成分增强免疫的机理，利用Primer Premier软件设计了一对干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）引物。采用RT-PCR技术，从ConA刺激的鸡外周血淋巴细胞总RNA中扩增出片段约为510bp的IFN-γ基因片段，并对其进行了酶切鉴定和测序。采用半定量RT-PCR法测定了复方中药成分对鸡外周血淋巴细胞中IFN-γ mRNA表达的影响。结果表明，方1和方2的3个剂量均能提高淋巴细胞中IFN-γ mRNA的表达，其中以方1中剂量最好。提示复方中药成分能促进IFN-γ mRNA的表达，可能是其增强免疫的机理之一。
