“检科一号”消毒剂是根据酸碱中和理论自主研制出的固体氧化还原电位消毒剂(ORPD)而定名的。其成分是羟基丁二酸和次氯酸钙为主要原料，通过与其他物质的配伍，按照一定的比例溶解在水中，pH值为6.8，产生964.4 mV的氧化电位，以及有效氯，与羟基、游离基、氢氧化物等共同产生杀菌作用。
该消毒剂已于今年8月底通过了专家鉴定。“检科一号”在1∶300的浓度下2 min能100%杀灭H5N1等禽流感病毒；在1∶480的浓度下，能100%杀灭
新城疫病毒；在1∶2 000的浓度下能100%杀灭口蹄疫病毒；同时还能有效地杀灭鸡法氏囊、鸡球虫、禽的沙门氏菌、巴氏杆菌、葡萄球菌、大肠杆菌等病原微生物。
现将“检科一号”消毒剂对禽流感病毒(H5N1)的杀灭实验报告如下。
1 材料与方法
1.1检科一号消毒剂白色粉末，A、B各一袋重162 g，由中国检科院送检。
1.2禽流感病毒毒株为A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)，由中国农科院哈尔滨兽医研究所提供。
1.3鸡胚和中和剂10日龄SPF鸡胚，和0.1 mol硫代硫酸钠PBS，由中国农科院哈尔滨兽医研究所实验室提供。
1.4预备试验 包括消毒剂母液的调制，病毒EID50的测定，测定消毒剂对鸡胚的最大无毒剂量，测定中和剂对鸡胚的最大无毒剂量，测定消毒剂与中和剂的反应产物对鸡胚的影响，测定中和剂对病毒鸡胚中增殖的抑制作用。
1.5对病毒的杀灭率试验采用Klein-Defors的悬浮方法进行，以PBS缓冲液对消毒剂进行10倍系列稀释，接种并检测感染鸡胚情况。
1.5.1病毒悬液的制备将禽流感H5亚型病毒配制成107.5EID50/0.1 ml病毒悬液。
1.5.2配制使用浓度的消毒剂将预试验中配制的检科一号消毒剂母液，用PBS缓冲液稀释成1∶30的使用浓度。杀灭试验时再稀释成不同稀释度。
1.5.3 Klein-Defors悬浮杀灭试验按使用说明将检科一号消毒剂稀释成浓度为使用浓度1/2、1/4、1/8、1/10、1/12、1/14及1/16使用浓度的8个稀释度，分别与107.5EID50的H5亚型禽流感病毒悬液按9∶1混合，在室温条件下(20～25℃)下分别作用2 min、5 min、10 min、20 min后，与PBS缓冲液配制的中和剂溶液1∶9混合并作用10 min，再用PBS缓冲液分别做10倍递进稀释，做10倍稀释度。阴性对照组用PBS缓冲液替代消毒液，同法处理；阳性对照组用使用浓度和两倍使用浓度的百毒杀代替消毒液，同法处理；稀释液接种10日龄SPF鸡胚，每个稀释度接种5枚鸡胚(0.1 ml/胚)。将接种的鸡胚置37℃温箱中培养，记录鸡胚死亡情况。24 h以内死亡的鸡胚去掉，24 h以后的死胚及时取出，至96 h全部取出，逐个取尿囊液做血凝(HA)试验，血凝试验阳性者判为鸡胚感染。不测定血凝价，只是测定有无血凝活性：每个鸡胚取鸡胚尿囊液100 μl置于血凝平板，加鸡红细胞100 μl，静置15 min，判断结果。
2 结果
2.1病毒EID50的测定 将禽流感H5 亚型病毒10倍系列稀释，接种10日龄鸡胚，每个稀释度5枚鸡胚(0.1 ml/胚)，试验结果显示病毒的半数感染剂量(EID50)为107.63EID50/0.1 ml。
2.2 对鸡胚的最大无毒剂量用PBS缓冲液稀释的母液1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32稀释度的消毒剂溶液分别接种10日龄鸡胚，每个稀释度5枚鸡胚(0.1 ml/胚)，试验结果显示消毒剂母液和任何稀释液对鸡胚无眼观毒害作用。
2.3 中和剂对鸡胚的最大无毒剂量用PBS缓冲液稀释的母液1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32稀释度的中和剂溶液，分别接种10日龄鸡胚，每个稀释度5枚鸡胚(0.1 ml/胚)，试验结果中和剂母液和任何稀释液对鸡胚无眼观毒害作用。
2.4 消毒剂与中和剂的反应产物对鸡胚的影响用PBS缓冲液稀释的母液1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32稀释度的消毒剂溶液与中和剂以1∶9混合，分别接种10日龄鸡胚，每个稀释度5枚鸡胚(0.1 ml/胚)，试验结果显示消毒剂母液和任何稀释液与中和剂的作用对鸡胚无眼观毒害作用。
2.5 中和剂对病毒鸡胚中增殖的抑制作用以107.5EID50的H5亚型禽流感病毒与中和剂1∶9混合并作用10 min，10倍递进稀释，分别接种10日龄鸡胚，试验结果显示，病毒的EID50依然为毒剂107.5EID50/0.1 ml，表明对病毒在鸡胚中的增殖无抑制作用。
2.6 消毒剂对禽流感病毒的杀灭作用用PBS缓冲液将检科一号消毒剂稀释成浓度为使用浓度1/2、1/4、1/8、1/10、1/12、1/14及1/16使用浓度，分别与107.5EID50的H5亚型禽流感病毒悬液作用2 min、5 min、10 min、20 mi，使用浓度的杀灭病毒率分别为99.97%、100%、100%、100%；1/2使用浓度的杀灭病毒率分别为0%、68.37%、96.83%、99%；1/4使用浓度的杀灭病毒率分别为0%、0%、68.37%、90%；1/8使用浓度的杀灭病毒率分别为0%、0%、0%、68.37%；1/16使用浓度的杀灭病毒率分别为0%、0%、0%、0%；浓度为使用浓度和2倍使用浓度的百毒杀与107.5EID50禽流感H5亚型病毒液作用10 min，杀灭病毒率分别为99.99%、100%；结果见表1。
表1 不同浓度的检科一号消毒剂对禽流感H5N1亚型病毒的杀灭作用（略）
3 小结
采用Klein-Defors悬浮杀灭与感染试验法，研究检科一号消毒剂在不同浓度下，分别与禽流感H5N1亚型病毒(9∶1)在体外直接接触作用2 min、5 min、10 min和20 min，以此来检测体外该消毒剂对禽流感病毒的杀灭效果。结果表明，检科一号消毒剂在使用浓度时与禽流感病毒作用2 min、5 min、10 min、20 min，对病毒的杀灭率可达到99.9%，有较好的杀病毒作用；在1/2使用浓度时与禽流感病毒作用5 min、10 min、20 min，对病毒的杀灭率可达到68.37%、96.83%、99%，有一定的杀病毒作用；在1/4使用浓度时与禽流感病毒作用10 min、20 min，对病毒的杀灭率可达到68.37%、90%，有一定的杀病毒作用；在1/8使用浓度时与禽流感病毒作用20 min，对病毒的杀灭率可达到68.37%，有一定的杀病毒作用。除此之外，上述未提到的与禽流感病毒作用不同时间的相关浓度的消毒剂对禽流感病毒不起杀灭作用。
4 讨论
4.1 “检科一号”消毒剂的研发主要是氧化还原电位水(EDW)的启发。20世纪80年代，日本独立开发的EDW，其理化指标为：高氧化还原电位(OPR)800～1 100 mV，pH 2.0～2.8，有效氯含量10～50 mg/L，同时还含有活性氧，过氧化氢和羟基等化学因子，且EOW无色、透明、具有氯味，需室温、密闭、闭光保存。若接触光线，有机物会还原成盐和水失去杀灭微生物的作用。
EDW问世后，因其具有显著的杀灭微生物作用而被日本认为手洗液和内镜的消毒液，被世界卫生组织(WHO)认可为创口、创面的消毒剂和医疗环境大毒。后被应用在食品加工环节中的灭菌消毒和动物养殖过程中的饮水消毒等方面。但也发现EOW存在着严重缺陷，如pH值低、性质不稳定、腐蚀性强、氯味大，以及EOW为液体，不便运输等。
“检科一号”(ORPD)的研制，解决了EOW存在的上述缺陷和不足。“检科一号”为固体粉末，易于运输、包装、存储和大面积推广使用，并突破了低温对消毒灭菌效果的影响。抗有机物干扰能力强，不产生抗药性和残留，对有生命机体组织无损害、对皮肤、黏膜无刺激。
4.2近年来，高致病性禽流感在我国的周边国家和地区频繁发生，2003年我国的部分省市和地区也暴发了高致病性禽流感(H5N1)给养禽业和人类健康造成了严重的损失和威胁，先后有40多个国家和地区禁止我国的活禽，冰鲜、冰冻禽肉及其制品的进口。因高致病性禽流感(H5N1)病毒变异后可感染人，在越南和泰国等亚洲地区先后已有63人死于本病，引起人类对禽流感感到恐慌。在这种情况下，我院研制“检科一号”消毒剂的研发与应用被列为国家科研项目，给予经费支持用于研发与试点应用。先后在吉林德大食品(肉鸡)有限公司、山东潍坊地区的几个肉鸡企业、乐港肉鸡食品公司以及辽宁的大成肉鸡企业集团进行了带鸡消毒的试点，建立了应用“检科一号”消毒剂的带鸡消毒的技术体系，并获成功。
