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黄芪皂苷类成分的HPLC指纹谱研究佚名

放大字体  缩小字体 发布日期:2009-01-15  来源:btwsy  作者:高强  浏览次数:276

摘 要: 目的:研究黄芪药材皂苷类成分的指纹谱。方法:色谱柱:Hypersil

ODS(4.6×250mm,5-Micro),流动相:乙腈:水(梯度洗脱),柱温:30℃,检测波长:203nm,分析时间:60min,流速:1.0ml/min。结果:共标出黄芪药材13个共有峰。结论:该方法可用于黄芪药材的指纹图谱质量控制。

关键词 黄芪 色谱指纹谱 HPLC

指纹图谱质控技术是保证中成药功效、实现中药现代化的关键<1>。控制中成药质量,首先要抓源头,控制中药材的质量。蒙古黄芪分布于河北、山西、内蒙古。本文研究所用黄芪产地来源于山西雁北地区。山西雁北地区的浑源、应县、阳高等地的黄芪,品质极佳,该地区种植面积16000公倾,出口量占我国黄芪出口量的60%以上<2>。本文采用HPLC研究了山西产蒙古黄芪的指纹图谱,以控制药材质量。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Agilent1100高效液相色谱仪,包括:四元泵,在线脱气机,柱温箱,VWD检测器,化学工作站(chimstation

system工作站);

1.2 试剂

乙腈:HPLC级,美国天地(TEDIA)试剂公司。

人参皂苷Re对照品:中国药品生物制品检定所,批号:0754-9608。

2 方法与结果

2.1色谱条件

柱:ZORBAXSB-C18(4.6×250mm,5-Micro);柱温:30℃;检测波长:203nm;分析时间:70min;流速:1.0ml/min;进样量:供试品溶液与对照品溶液各20ul;理论板数以人参皂苷Re计算应不低于200000。

2.2 内标选择与配制

对照品选择:黄芪甲苷对照品吸收较弱,且样品中其对应峰很低,不便于分析;人参皂苷Re在此分析条件下与黄芪中其它成分可较好分离,因此选作内标,图1为加有内标人参皂苷Re的药材样品图,图2为人参皂苷Re的图谱,图3为未加内标的药材样品图。

对照品配制:精密称取人参皂苷Re对照品2mg,置5ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。

2.3 供试品的制备

取药材粗粉2g,加甲醇50ml回流提取2次,每次2小时,合并甲醇液,回收甲醇,残渣加热水10ml溶解,用等量水饱和的正丁醇萃取5次,合并正丁醇液,用等量氨试液洗涤一次,弃氨试液,正丁醇液水浴蒸干,残渣加60%乙腈溶解至5ml,离心,过滤,取滤液1ml,加内标(人参皂苷Re0.4mg/ml)1ml,摇匀,作为供试品溶液。

2.4 流动相的选择

经试验比较,以乙腈:水为流动相,梯度洗脱能较好地使样品中各色谱峰分离且出峰最多;分析时间60分钟,样品2小时图谱显示,60分钟后无特征峰出现。

2.5 方法学考察

(1)稳定性试验:

取同一供试品溶液,分别于0、2、4、8、24小时检测,其相对保留时间稳定,主要共有峰相对峰面积RSD为1.45%。结果表明:供试品溶液稳定性较好。

(2)精密度试验:

取同一供试品溶液,连续进样5次,其主要共有峰相对峰面积RSD为1.13%,符合规定。

(3)重现性试验:

取同一批号供试品5份,分别处理测定,主要共有峰相对峰面积RSD为0.86%,符合规定。

2.6 样品测定

①测定了10批样品,其指纹图谱峰相对保留时间:表1。

②样品指纹图谱中主要峰的相对峰面积:表2。

3 结论与讨论

3.1以人参皂苷Re为内标,研究标示了蒙古黄芪药材指纹图谱共有峰13个,相对保留时间依次为:0.037、0.059、0.130、0.794、1.027、1.047、1.093、1.125、1.421、1.441、1.456、1.491、1.616。

3.2 《中国药典》规定黄芪来源于蒙古黄芪与膜荚黄芪,本文研究了山西浑源产蒙古黄芪Astragalus

membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus

(Bge.) Hsiao的指纹图谱。膜荚黄芪的指纹谱及其与蒙古黄芪的指纹谱的特征有待进一步研究。

3.3 由于黄芪皂苷类成分UV没有特征吸收,因此本文选择其末端吸收203nm作为检测波长,结果表明,方法可行。

3.4蒙古黄芪在本文条件下指纹图谱的特征为两组7强峰:第一组4强峰相对保留时间依次为:1.027、1.047、1.093、1.125,第二组3强峰相对保留时间依次为:1.421、1.456、1.491,比较容易识别。


 
 
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