刘朝明吴彩霞邓凤如 梁宙宁郭铭生 华南农业大学兽医学院
犬消化系统疾病是临床上的常见疾病，本试验针对10例临床上有明显腹泻症状犬的粪便进行病原菌的分离培养，并经过药物敏感试验选出抗菌作用强的药物来指导临床用药。
一、材料和方法
1.病料采样兽医院临床病例，有腹泻症状，表现为精神沉郁，腹泻，拉稀样、血样或番茄汁粪便，有腥臭味，体温升高的病犬。
用无菌棉签采集量体温后粘在温度计上的粪便，放入无菌肉汤中培养基中培养。
2.药物敏感试验采用纸片扩散法，将取得的病料接种于普通营养肉汤，置37℃恒温箱培养24小时，用灭菌棉签沾取已培养的菌液均匀涂布于琼脂平板上，倒扣平皿置37℃恒温箱培养15分钟，表面干燥后取出，再将药敏试纸贴于涂菌的表面，置37℃恒温箱培养18~24小时，依抑菌圈的大小来判断细菌的敏感性。抑菌圈大于20毫米为极敏，15~20毫米为高敏，10~15毫米为中敏，小于10毫米为耐药。
3.结果及分析 结果见表1。
表1药敏试验结果
表1.药敏试验结果
药物名称 | 抑菌圈(单位：mm) | |||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
氨苄西林 | 18.6 | 20.5 | - | 11.1 | 18.5 | 15.8 | 15.1 | 16.7 | 13.2 | 15.2 |
呋喃妥因 | 15.4 | 17.3 | 18.2 | 19.1 | 21.3 | 20.1 | 16.8 | 18.3 | 15.7 | 15.8 |
链霉素 | 16.1 | 19.5 | 10.3 | - | 11.4 | - | 13.2 | - | - | 11.1 |
头孢氨苄 | 16.4 | 17.3 | 17.7 | 15.5 | 18.3 | 17.2 | 19.6 | 18.2 | 16.2 | 16.1 |
环丙沙星 | 23.6 | 21.7 | 20.0 | 22.2 | - | 15.3 | 20.2 | 23.8 | 22.1 | 20.6 |
妥布霉素 | 15.3 | - | 15.1 | 14.7 | 16.8 | 13.1 | 13.2 | 14.1 | - | - |
庆大霉素 | 20.4 | - | 16.7 | 13.4 | 15.6 | 25.3 | - | - | 16.2 | - |
卡那霉素 | 18.2 | - | - | 15.3 | 16.1 | 16.2 | - | - | - | 16.7 |
林可霉素 | - | - | - | 16.1 | 13.6 | 15.1 | - | 13.2 | - | - |
恩诺沙星 | 16.7 | 20.4 | 17.5 | - | 17.9 | 17.4 | - | 18.1 | 17.3 | 19.5 |
氧氟沙星 | 19.2 | 20.3 | 19.0 | 19.4 | 12.2 | 13.3 | 15.4 | 16.5 | 14.2 | 16.6 |
诺氟沙星 | 18.1 | 17.5 | 17.4 | 17.9 | 15.8 | 19.5 | 20.3 | 19.3 | 17.4 | 16.5 |
注：“－”为无抑菌圈，1－10代表十个病例
结果显示，氨苄西林、呋喃妥因、头孢氨苄、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星和氧氟沙星对以上病例的病原菌有抑菌作用，且抑菌圈较大，说明大多数病原菌对以上几种药比较敏感；而链霉素、庆大、卡那、林可等的效果相对不佳，只对其中少数病例有抑菌作用，说明很多细菌对抗生素类药物已经不敏感。
二、细菌分离鉴定
细菌分离纯化 从已培养的菌液中用接种环挑取后接种于麦康凯平板，置37℃恒温箱培养18~24小时，观察菌落形态及生长状况；
挑取单个菌落接种于另一麦康凯平板，以同样的条件培养18~24小时，同样观察菌落形态及生长状况，挑取单个菌落做革兰氏染色并在显微镜下观察染色情况及细菌形态；
重复上一步骤7~8次作细菌纯化，直到在显微镜下每个视野观察细菌颜色和形态一致，无其它杂菌时为止。
10个病例经染色镜检，革兰氏阳性菌占1例，革兰氏阴性菌9例，均呈杆状或球杆状，并对其中9例阴性菌进行生化鉴定。
生化鉴定 生化试剂：硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、蛋白胨水、葡磷胨水、拘橼酸盐、尿素、半固体琼脂、葡萄糖产气、赖氨酸、鸟氨酸、棉子糖、山梨醇、侧金盏花醇、木胶糖，鉴定结果见表2
表2 生化鉴定结果记录表
生化鉴定结果记录表
实验项目 病例 | 4 | 2 | 1 | 4 | 2 | 1 | 4 | 2 | 1 | 4 | 2 | 1 | 4 | 2 | 1 | |
硫化氢 | 苯丙氨酸 | 葡萄糖酸盐 | 蛋白胨 | 葡磷胨水 | 拘橼酸盐 | 尿素 | 半固体琼脂 | 葡萄糖产气 | 赖氨酸 | 鸟氨酸 | 棉子糖 | 山梨醇 | 侧金盏花醇 | 木胶糖 | ||
1 | 结果 | - | - | - | + | + | - | - | - | - | + | - | - | + | - | + |
总值 | 0 | 6 | 0 | 4 | 5 | |||||||||||
2 | 结果 | - | - | - | + | + | - | - | - | + | + | + | - | + | - | + |
总值 | 0 | 6 | 1 | 6 | 5 | |||||||||||
3 | 结果 | - | - | - | + | + | - | - | - | - | + | - | - | - | - | + |
总值 | 0 | 6 | 0 | 4 | 1 | |||||||||||
4 | 结果 | - | - | - | + | + | - | - | - | - | + | + | - | + | - | + |
总值 | 0 | 6 | 0 | 6 | 5 | |||||||||||
5 | 结果 | - | - | - | + | + | - | - | - | - | + | - | - | + | - | - |
总值 | 0 | 6 | 0 | 4 | 4 | |||||||||||
6 | 结果 | + | - | - | + | + | - | - | + | + | + | + | - | + | - | + |
总值 | 4 | 6 | 3 | 7 | 5 | |||||||||||
7 | 结果 | + | - | - | + | + | - | - | - | + | + | - | - | + | - | + |
总值 | 4 | 6 | 1 | 4 | 5 | |||||||||||
8 | 结果 | + | - | - | + | + | - | - | - | - | - | - | - | + | - | - |
总值 | 4 | 6 | 0 | 0 | 4 | |||||||||||
9 | 结果 | - | - | - | + | + | - | - | + | - | + | - | - | + | - | - |
总值 | 0 | 6 | 2 | 4 | 4 |
结果根据肠杆菌科GYZ-15e编码鉴定结果对照可知病原菌种类及株数。
病原菌 | 株数 |
A-D大肠埃希氏菌 | 6 |
大肠埃希氏菌 | 3 |
试验结果显示：本次试验中的细菌均为大肠杆菌。
三、小结
由于氨基糖苷类药物在临床上广泛大量的应用，耐药菌株逐年增多，导致临床应用效果不理想，临床上应避免单纯用药；
通过药敏试验结果，可以参考药效，指导临床用药方案，避免盲目用药；
尽可能使用抑菌圈大的药，同时注意用药原则，防止副反应发生。