笔者从中药木鳖子中提取ECMS，将ECMS和商品口蹄疫疫苗混合注射豚鼠、奶牛和猪，然后检测动物的血清抗体效价。结果表明，ECMS和口蹄疫疫苗混合后，可以使抗体效价升高，有效期延长。
一、试验材料
将中药木鳖子粉碎，用乙醇回流提取，减压浓缩，乙醚萃取以除去脂溶性成分等步骤，得到淡黄色木鳖子提取物粉末（ECMS）。
二、试验方法
（一）ECMS对口蹄疫疫苗诱导豚鼠体液免疫反应的试验
将35只雄性豚鼠（体重220±10克）随机分为7组，每组5只。每组动物肌肉注射牛口蹄疫Asial-O型双价灭活疫苗（内蒙古生物药品厂）或者口蹄疫疫苗和佐剂的混合物，每只豚鼠免疫2次，间隔时间为3周，每次注射剂量如表1所示。
表1每只豚鼠一次注射口蹄疫疫苗和佐剂的剂量
组别 | 豚鼠（只） | 口蹄疫疫苗（毫升） | 佐剂（微克） |
1 | 5 | 0.5 | 2500（ECMS） |
2 | 5 | 0.5 | 500（ECMS） |
3 | 5 | 0.5 | 100（ECMS） |
4 | 5 | 0.5 | 20（ECMS） |
5 | 5 | 0.5 | 100(QA) |
6 | 5 | 0.5 | 0 |
7 | 5 | 0 | 0 |
二免后3周采血，分离血清，-20℃保存待用。血清在检测前经56℃水浴30分钟。按照说明书，采用正向间接血凝试验试剂（中国农业科学院兰州兽医研究所生产）检测血清口蹄疫。
（二）ECMS对口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的效果试验
1.不同剂量ECMS对口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的试验 将24头黑白花青年奶牛，随机分为4组，每组6头。每组动物颈部肌肉注射牛口蹄疫Asial-O型双价灭活疫苗（内蒙古生物药品厂）或者口蹄疫疫苗和佐剂的混合物，每头奶牛免疫2次，间隔时间为2个月，每次注射剂量如表2所示：
表2每头奶牛一次注射口蹄疫疫苗和佐剂的剂量
组别 | 豚鼠（只） | 口蹄疫疫苗（毫升） | ECMS（毫克） |
1 | 5 | 2 | 0.5 |
2 | 5 | 2 | 1.0 |
3 | 5 | 2 | 2.0 |
4 | 5 | 2 | 20 |
5 | 5 | 2 | 0 |
首免前和首免后1个月，以及二免后1个月采血，分离血清，-20℃保存。血清在检测前经56℃水浴30分钟。按照说明书，采用正向间接血凝试验试剂（中国农业科学院兰州兽医研究所生产）检测血清口蹄疫抗体。
2.ECMS对不同剂量口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的试验 黑白花奶牛24头，随机分为3组，每组8头。每组动物颈部肌肉注射口蹄疫Asial-O型双价灭活疫苗（内蒙古生物药品厂）或者口蹄疫疫苗和佐剂的混合物，每头奶牛免疫1次，每次注射剂量如表3所示。
表3每头奶牛一次注射口蹄疫疫苗和佐剂的剂量
组别 | 豚鼠（只） | 口蹄疫疫苗（毫升） | ECMS（毫克） |
1 | 8 | 3.0 | 0 |
2 | 8 | 3.0 | 1 |
3 | 8 | 3.0 | 1 |
首免前和首免后1个月，分离血清，-20℃保存。血清在检测前经56℃水浴30分钟。按照说明书，采用正向间接血凝试验试剂（中国农业科学院兰州兽医研究所生产）检测血清口蹄疫抗体。
3.ECMS对口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应持续时间的试验 将黑白花奶牛12头随机分为2组，每组6头。试验组每头奶牛肌肉注射2毫升口蹄疫疫苗（牛口蹄疫O型浓缩疫苗，内蒙古生物制品厂）和1毫克ECMS混合物，对照组每头奶牛仅注射2毫升疫苗。
分别于免疫前、免疫后1个月采血，以后每2个月采血1次，连续2次，共采血4次，分离血清，-20℃保存。血清在检测前经56℃水浴30分钟。按照说明书，采用正向间接血凝试验试剂（中国农业科学院兰州兽医研究所生产）检测血清口蹄疫抗体。
(三)ECMS对口蹄疫疫苗诱导猪体液免疫反应的效果试验
1.ECMS对猪口蹄疫抗体水平以及免疫合格率的影响试验 将23头60日龄仔猪随机分为2组。第一组为试验组，12头，每头猪注射2毫升疫苗（猪口蹄疫O型灭活苗Ⅱ型，中牧实业股份有限公司，兰州生物药厂），免疫中混入ECMS1毫克；第二组为对照组，11头，仅注射2毫升疫苗。分别于免疫前和免疫后3周采血，分离血清，-20℃保存。血清在检测前经56℃水浴30分钟。按照说明书，采用正向间接血凝试验试剂（中国农业科学院兰州兽医研究所生产）检测血清口蹄疫抗体。
2.对不同母源抗体水平仔猪免疫口蹄疫疫苗的效果 将48头60日龄仔猪分为高母源抗体（≥1：128，25头）和低母源抗体（<1：128，23头）两大类。各类再随机分成1，2，3，4四组，各组仔猪免疫时将疫苗和ECMS混合。各组每头份ECMS的含量分别是1毫克，2毫克，3毫克，4毫克和0毫克（对照组）。分别于免疫前和免疫后3周采血，分离血清，-20℃保存。血清在检测前经56℃水浴30分钟。按照说明书，采用正向间接血凝试验试剂（中国农业科学院兰州兽药研究所生产）检测血清口蹄疫抗体。
三、统计分析
运用pass软件One-Way ANOVE模式进行数据分析，所有组用Turkey检验法进行组间比较，p<0.05为差异显著。
四、试验结果
（一）ECMS对口蹄疫疫苗诱导豚鼠体液免疫反应的效果试验
口蹄疫疫苗和ECMS或者和QA混合免疫动物比用口蹄疫疫苗单独免疫可诱导更高的IHA效价，其中ECMS 100微克和QA100微克组的IHA效价显著高于对照组（p<0.05）。
（二）ECMS对口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的效果试验
1.不同剂量ECMS对口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的影响给奶牛免疫2次口蹄疫疫苗以后，各组奶牛的平均抗体水平显著上升。其中注射含ECMS疫苗的奶牛平均抗体增幅高于对照组，以2毫克剂量组的平均抗体水平最高，和对照组比较有显著差异（p<0.05）。
2.ECMS对不同剂量口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的效果试验奶牛免疫口蹄疫疫苗以后，各组的平均抗体水平显著上升。抗体平均水平和免疫合格率以常规疫苗剂量和ECMS混合组最高，常规疫苗剂量组和1/2疫苗剂量+ECMS组差异不大，各组之间无显著性差异（p>0.05）。
表4 ECMS对不同剂量口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应的影响
组别 | 奶牛头数（头） | 免疫前 | 免疫后 | ||
IHA效价Log（X±SD） | 抗体合格率*（%） | IHA效价Log（X±SD） | 抗体合格率*（%） | ||
常规剂量（3毫升） | 8 | 2.38±1.77 | 0 | 9.62±4.37 | 62.5 |
常规剂量（3毫升）+ECMS（1毫克） | 8 | 3. 92±1.69 | 0 | 11.25±3.28 | 100 |
1/2剂量（1.5毫升）+ECMS（1毫克） | 8 | 4.625±2.45 | 12.5 | 9.25±2.60 | 75 |
*牛血清IHA效价1：256（28）为合格
3.ECMS对口蹄疫疫苗诱导奶牛体液免疫反应持续时间的影响 如图3所示，奶牛注射口蹄疫疫苗以后1个月检测，每头牛的抗体水平平均达到合格，免疫以后3个月和5个月检测，第2组的抗体水平趋于下降。其中对照组的抗体水平下降较迅速，免疫合格率只有33%和50%；试验组的抗体水平下降速度较缓，显著高于对照组（p<0.05），抗体合格率达到100%。
（三）ECMS对口蹄疫疫苗诱导猪体液免疫反应的试验
1. ECMS提高猪抗体水平以及免疫合格率试验ECMS组IHA效价的升高幅度比对照组大，抗体合格率也由免疫前的33.3%提高到50%。但对照组的抗体合格率免疫前后不变，两组无统计学差异。
表5ECMS对口蹄疫疫苗诱导猪体液免疫反应的影响
组别 | 奶牛头数（头） | 免疫前 | 免疫后 | ||
IHA效价Log（X±SD） | 抗体合格率*（%） | IHA效价Log（X±SD） | 抗体合格率*（%） | ||
口蹄疫疫苗+ECMS | 12 | 5.75±2.42 | 33.3 | 7.17±2.08 | 50.0 |
口蹄疫疫苗 | 11 | 6.00±3.10 | 36.4 | 6.55±2.30 | 36.4 |
*血清IHA≥1：128（27）为合格。
2.ECMS对不同母源抗体水平仔猪免疫口蹄疫疫苗的试验 在母源抗体水平大于或等于1：128的情况下，一次注射口蹄疫疫苗后，抗体水平下降，但在母源抗体水平小于1：128的情况下，一次注射口蹄疫疫苗后，抗体水平平均有所升高。其中以疫苗中加入ECMS组的抗体增加幅度较大，ECMS为4毫克时，抗体水平显著高于未加ECMS的对照组（p<0.05）。
五、结论
经试验结果表明，不同剂量的ECMS和口蹄疫疫苗混合注射比用口蹄疫疫苗单独注射，可以使豚鼠产生更高的IHA抗体。本试验中，ECMS的剂量为100毫克时产生的佐剂效果最强。虽然无统计学差异，但从数值上看，比国外的皂树皮提取物QuilA的佐剂作用还强。
给奶牛免疫时，口蹄疫疫苗中加入ECMS0.5毫克、1毫克和2毫克均有免疫增强作用，以2毫克ECMS的增强作用最为明显。
本试验在采用一半剂量（1.5毫升）混合ECMS免疫奶牛，从数值上看，抗体合格率（70%）高于不加ECMS的常规剂量（3毫升）组（62.5%）。奶牛接种口蹄疫疫苗后，一般21天开始检测到抗体，150天后抗体合格率已下降到50%以下。
因此，为了达到理想的免疫效果，一般要求奶牛一年注射口蹄疫疫苗3次以上。本试验对照组奶牛注射口蹄疫疫苗3个月后，抗体合格率降至33%，而疫苗中混入ECMS免疫5个月后检测，抗体合格率为100%，一年免疫2次即可。
给猪注射口蹄疫疫苗的效果很多情况下不理想。本试验发现，在母源抗体较高的情况下注射口蹄疫疫苗，抗体水平普遍下降；但母源抗体较低时，注射口蹄疫疫苗后，抗体水平普遍升高，在疫苗中加入ECMS后，抗体的升高幅度加大，使抗体合格率起码增加10%。