1 试验材料
1.1 三黄加白散制剂 取黄连30 g，黄柏15 g，黄芩15 g，白头翁30 g，玄参10 g，生地5 g，麦冬5 g，研细，混合均匀，取混合物2 g加适量蒸馏水充分浸泡后文火煮沸，多层纱布过滤，将滤液加热浓缩备用，此滤液即为三黄加白散有效浓度抗菌药液。
1.2 抗菌药敏纸片的制作 将直径6 mm的无菌滤纸纸片100片，浸入上述1 ml滤液中充分混合，37℃温箱中烘干，备用。
1.3 鸡大肠杆菌菌种 取养殖场自然发病典型病鸡，无菌操作取心血接种伊红美蓝琼脂平板培养基，分离出鸡大肠杆菌，经生化试验和攻毒试验确定为病原性大肠杆菌，作为试验用菌种。
1.4 微生物培养用品 培养箱， 乳糖胆盐肉汤培养基， 细菌接种用具，营养琼脂，微量移液器，酸碱指示剂等。
2 抑菌试验
2.1 最初药敏试验 将上述分离出的鸡病原大肠杆菌野毒菌种涂布法接种营养琼脂，粘贴自制的药敏纸片，37℃培养16 h，结果加减三黄加白散对鸡大肠杆菌的抑菌直径平均为21 mm。
2.2 最小抑制浓度试验 分别取灭菌试管若干支，加入5 ml乳糖胆盐肉汤培养基，滴加指示剂，倒置童氏小管，用微量移液器吸取三黄加白散煮沸滤液分别加入各培养基中，使其抗菌药液浓度梯度依次为1/10，1/100，1/1 000，1/10 000，1/100 000，……无菌操作将分离的菌种接入，37℃培养24 h后观察大肠杆菌生长情况，结果如表1。
表1 大肠杆菌在不同的浓度的抗菌药液中生长情况(略)
判定：指示剂色泽明显改变、倒置童氏小管中产生较多气体的为生长良好；指示剂色泽略有改变、倒置童氏小管中产生少量气体的为生长不良；指示剂色泽几乎不改变、倒置童氏小管中没有气体的为不生长。
2.3 耐药性试验 将上面试验中生长不良试管中菌液移接至同级抗菌药液浓度的新培养基中继代培养，当生长良好时移接至下一个10倍浓度的培养基中培养，直至不再继续生长为止。结果：大肠杆菌在10-4抗菌浓度培养基连续继代至第6代开始生长良好，移接下一个10倍抗菌浓度培养基中连续继代仍然不能正常生长。
2.4 敏感性恢复试验 将耐药性试验中第6代培养物移接无抗菌药液的乳糖胆盐肉汤培养基中继代培养，每一代培养物均作药敏试验，同时记录，结果如表2。
表2 大肠杆菌敏感性恢复记录(略)
3 临床试验
分别对不同日龄品种的雏鸡进行口服攻毒接种病原性大肠杆菌，检出发病雏鸡，将发病雏鸡口服三黄加白散抗菌药液，方法：将加减三黄加白散混合粉剂1 000 g充分浸泡反复煮沸后过滤，将滤液浓缩成1 000 ml，剂量为发病雏鸡每天口服1 ml/kg体重，治疗结果如表3。
表3 加减三黄加白散对大肠杆菌病的治疗情况(略)
4 讨论
4.1 通常草药的药敏试验抑菌直径达10 mm以上即为高敏，从药敏试验和临床防治试验中可以看出，加减三黄加白散对鸡大肠杆菌有明显的抑制作用和治疗作用。
4.2 由于中药抗菌有效成分结构复杂，微生物不易适应，鸡大肠杆菌对加减三黄加白散几乎很难产生耐药性，即使产生微弱的耐药后，仍有较强的抗菌作用，而且停药后能较快的恢复对其敏感性。
4.3 从试验中看出，加减三黄加白散最小抑菌浓度为10 -4有效浓度，根据禽类消化生理特点，按50%吸收率计算，折合每日每公斤体重至少要口服0.2 g粉剂。
4.4 对黄连、黄柏、黄芩、白头翁、玄参药理研究表明，这些中草药对肠杆菌科的细菌均有不同程度的抑制作用，并且具有调节循环和机体内环境、增强免疫力、降体温、解痉镇痛止血等药理作用，对大肠杆菌引起的各种病理变化均有较好的治疗作用。
4.5 中医辩证认为鸡大肠杆菌病是属于外感风热，热结肠间形成湿热下注，热结于上中下三焦，引起三焦实热，耗损津液。即临床常见的肠炎型、腹膜炎肝周炎型、肺炎气囊炎心包炎型。治则以清热燥湿、滋阴抑阳、凉血生津为主。中药黄连、黄柏、黄芩、白头翁性味苦寒、入大肠、心肺、肝胆、肾经，具有清热燥湿的作用，增液汤玄参、生地、麦冬有凉血生津作用，加减三黄加白散符合本病的辩证施治。
4.6 加减三黄加白散可根据现场实际情况增减药物，如临床以肠炎型病变为主时可增加黄连剂量，呼吸症状为主时增加黄芩的剂量。必要时可辅助加入丹皮、金银花、桂枝、桔梗等中药，进一步增加不同病型鸡大肠杆菌病的治疗效果。
