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新城疫疫苗的研究进展

放大字体  缩小字体 发布日期:2007-12-01  来源:兽药市场指南  作者:信风  浏览次数:489

新城疫是由新城疫病毒引起的一种烈性病毒性传染病,是当今全球范围内重要的家禽传染病之一,目前,新城疫在全国范围内的发生仍然比较普遍。对于该病的控制,接种疫苗仍是主要手段,Allan曾对新城疫的免疫接种和疫苗产品等作了详细报道,同时,对于利用免疫接种控制新城疫,Meulmans也有详细论述。现笔者对世界上现有的几种主要新城疫疫苗的研究进展介绍如下。

一、活疫苗

活疫苗一般由感染胚囊液冻干而成,它可以大规模饮水免疫,也可用于喷雾和气雾,在短时间内可免疫大量鸡只,经济实惠。
通常新城疫病毒活疫苗分为两类:一种为缓发型,另一种为中发型。对于中发型的疫苗如H株、Rokin株等,由于毒力较强,只能用于二次免疫。Hithner和Johnson发现的B1株是一种天然弱毒株,几乎无致病性,不能完全致死鸡胚,可经滴鼻、点眼、饮水、气雾等多种途径接种免疫,均能达到良好的保护效果。另外La Sote株也是天然弱毒株,比B1株毒力稍强,为我国最常用的活疫苗之一。
宋立等用CS2株免疫后10天HI几何平均值(GMT)达到1:64~1:362,具有良好的免疫效果。此外,一种由澳大利亚V4株病毒制备的疫苗包被在鸡颗粒饲料上进行饲喂,也能达到良好的效果,但与作用载体的饲料有关。还有试验证实,饮水免疫时,在饮水中加入脱脂奶粉可在一定程度上稳定病毒活性。
活疫苗易于饮水、喷雾、气雾等,大规模养殖场使用,相对便宜。活病毒可刺激机体产生局部免疫,免疫后很快得到保护,而且疫苗还可以从免疫鸡传给未免疫鸡。
它的缺点是有一定的副作用,可能引发疾病,这主要取决于环境及是否有并发感染。因此,初次免疫接种应选毒力较弱的疫苗,一般需接种多次,且母源抗体对初次免疫影响极大。其次,疫苗毒在鸡群中散布,能传播到易感鸡群,特别是对不同日龄混养的鸡群影响更严重,尤其是有其它病原并发感染时。此外在生产过程中,如果控制不当,活疫苗易被杀灭、污染,有的毒力还可能返强。

二、灭活疫苗

灭活疫苗一般是感染性尿囊液用甲醛灭活后与载体佐剂混合后制成的油乳剂灭活苗。目前使用的佐剂主要有:矿物油、动植物油、脂质体、Avridine、ISCOMs弗氏完全佐剂等,其中Avridine具有刺激体液和黏膜免疫的功能。不同的油乳剂疫苗的乳化剂、抗原及水—油比不同,大多数使用矿物油。用来生产油乳剂疫苗的毒种一般包括Ulster2C、B1、La Sota及Rokin,它们均能在鸡胚中大量增殖,病毒滴度较高,在实际生产中多用来制造二联或多联疫苗,如传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病毒和产蛋下降综合征病毒等。
灭活疫苗能够诱导机体产生有效的免疫应答反应,产生高水平的抗体并持续较长时间,所以在以往发生新城疫的过程中,它成为控制疫情进一步蔓延与扩散、减少经济损失的有力武器,而且储存比较容易。
与活苗不同,一日龄雏鸡免疫受母源抗体影响小,并且免疫鸡副反应小,尤其是对有并发病原感染的鸡群。但其免疫效果是由注射剂量和疫苗中的抗原含量共同决定的,在进行免疫接种时往往需要比活疫苗高出许多倍的剂量,此外还必须添加佐剂,这就大大增加了灭活疫苗的成本。同时接种灭活疫苗的机体产生的针对病毒的特异性抗体,干扰了临床检测和检疫以及流行病学调查,这是灭活苗防治新城疫的最大障碍。为了解决这个问题,人们又开发了其他类型的新城疫疫苗。

三、亚单位疫苗

亚单位疫苗是利用重组DNA技术在高效表达系统表达新城疫病毒免疫原性基因,并辅以佐剂而制成的疫苗。作为研制新城疫亚单位疫苗的主要工具之一的杆状病毒载体系统,是以昆虫杆状病毒为外源基因,以昆虫和昆虫细胞为受体,由Luckkowt等创建的Bac-to-Bac系统,其构建和筛选方法简单,阳性重组率高,是目前最好的杆状病毒表达系统之一。后来利用此表达系统构建了表达新城疫病毒F基因的重组杆状病毒,在昆虫细胞中成功表达了F蛋白,并利用肌肉注射和腹腔注射作对比,二者均能诱导机体产生较高水平的抗新城疫病毒F蛋白抗体,具有良好的免疫原性。
此外,经试验证实,新城疫病毒F基因重组杆状病毒对致死性感染有完全保护作用。国外许多学者也研究表明,利用不同的载体表达的HN蛋白,对鸡群呈现良好的免疫保护作用。秦智锋等利用重组菌pGHN/DE3所生产的亚单位苗,免疫鸡后,可激发较高的HI抗体,但激发的中和抗体较弱。
基因工程亚单位疫苗虽然表现出良好的免疫反应,然而生产成本高,由于价格的限制,除非改进表达技术,显著降低成本,否则很难真正用于疫苗生产。

四、核酸疫苗

目前疫苗应用中最大的问题是免疫期短,其次,在有母源抗体存在的情况下,许多疫苗的免疫效果受到干扰。为了克服这两种缺陷,人们开始致力于基因疫苗的研究。
这种新型的免疫方法,目前被成为免疫学上的第三次革命,它不存在突变和返祖现象,无毒力恢复危险,摄入的DNA质粒既不会刺激机体产生DNA抗体,也不引起宿主自身免疫病。但其不足之处是刺激机体产生的免疫应答较弱,目的基因表达水平不高,而且长期表达低水平的外源蛋白易引起免疫耐受。
从目前越来越多的研究来看,DNA疫苗在预防和治疗方面具有很大的优势,它能够诱导CTL反应并能通过细胞因子进行免疫调节,虽然目前由于实验结果不足,还不足以说明DNA疫苗会超过现有的传统疫苗,但随着研究的进一步深入,DNA疫苗可能会首先应用于传统方法无法对付的病原体和疾病上。
DNA疫苗展现了美好的前景,但其潜在的危险还未完全排除,相信随着时间的推移,科学技术的发展,关于DNA疫苗的理论和实践问题的研究也会很快取得进展。

五、重组活载体疫苗

虽然DNA疫苗和亚单位疫苗均显示了良好的免疫性能,而且不会对公众健康和生态环境产生任何潜在的不良影响,但是受禽用疫苗价格的限制,往往难以在实际中推广应用。
因此,大多数学者主张新城疫疫苗的研究采用以病毒或细菌为载体的活疫苗技术路线,这方面的研究开始于用痘苗病毒构建重组病毒,随后发展了包括其它种类痘病毒、疱疹病毒、反转录病毒和沙门氏菌减毒株等活载体重组体,其中又以重组痘病毒和重组疱疹病毒研究最为深入。
经过试验,这些重组体作为疫苗是有效的,兼有活疫苗和亚单位疫苗的特点,所表达的抗原以半复制的形式提呈给宿主,可成功地诱导各种类型的免疫应答。
火鸡疱疹病毒(HVT)是最近发展起来的新型载体,它对鸡及其它动物均无致病性,接种后可刺激机体产生较高水平的抗体并维持终生,接种一次即可获得终生免疫,同时也是预防马立克病毒的常规疫苗,因此火鸡疱疹病毒是构建禽用基因工程苗的一种理想载体。
痘苗病毒作为真核表达载体,已经成功预防了天花,于是许多专家学者对用痘苗病毒构建重组疫苗来预防人类和动物的传染病很感兴趣。但由于痘苗病毒能在哺乳动物体内复制,用痘苗病毒作为载体存在许多副作用,因而重组痘苗病毒难以成为商品化禽用疫苗。
基于以上考虑,在哺乳动物中不能复制的鸡痘病毒、鸽痘病毒等具有宿主限制性的禽痘病毒,无疑是研制新城疫基因工程疫苗的理想载体。
关于重组禽痘病毒的免疫效力,几乎所有的报道都得出相似的结果,即不论是单独表达F或HN糖蛋白之一,还是表达F和HN糖蛋白,都能使SPF免疫鸡产生对强毒攻击的保护作用,而且这种免疫力至少维持8周。
保护率和免疫剂量有一定的相关性,曹殿军等构建了表达HN基因的重组鸡痘病毒,用该重组病毒106PFU/只免疫4周龄SPF鸡时,保护力可达80%,但如果降低到104PFU/只,其保护率仅为60%。这表明该重组病毒对雏鸡具有一定的保护作用,且接种剂量越大保护率越高。所以如何构建更好的FPV表达载体,以提高包括新城疫病毒在内的重组FPV疫苗的效果是一个关键问题。
可见,以鸡痘病毒为载体研制的新城疫病毒重组疫苗已显示良好的免疫效果,与传统的疫苗相比,具有高效、安全等优点,可同时预防禽痘病毒的感染,并可在载体中同时表达其他病毒基因,起到一苗防多病的作用。
随着我国养禽业的迅猛发展,对新城疫的防制越来越重要。因此研制出高效、安全、生产工艺、价格低廉、适用的新城疫疫苗有重要意义。
从上文的介绍来看,用来预防新城疫的各种疫苗在实际应用中还存在诸多问题,如活疫苗可能引发疾病,有的毒力还可能返强;油乳剂灭活疫苗由于自身的缺陷,特别是对疾病监控易产生不利影响;亚单位疫苗制作成本较高,免疫期短,不可能成为预防新城疫的理想疫苗;对于核酸疫苗的研究也才刚刚起步,尚有许多问题有待解决。
目前对表达F基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗的研究较为深入,从多个角度分析这是一种较为理想的疫苗。这种基因工程疫苗的保护率较高,又不干扰临床检测和检疫,是极有发展前途的一类抗新城疫病毒的基因工程疫苗,有可能在生产上首先被广泛使用。但是,由于种鸡和商品鸡一般都进行针对新城疫病毒和鸡痘病毒的多次免疫,母源抗体不仅干扰常规弱毒疫苗,也同样干扰基因工程疫苗的免疫效力,与常规疫苗不同的是,不仅载体病毒的母源抗体会干扰免疫效力,而且提供目的基因病毒的母源抗体也会干扰重组病毒的免疫效力。如何克服以上缺点,使基因工程疫苗得到广泛的推广将是今后研究的重点。

 
 
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