在目前鸡马立克氏病（MD）的免疫预防中，CVI988/Rispens冷冻活疫苗是目前全世界应用范围最广泛、免疫效果最好的疫苗。该毒株最初是由B.H.Rispens博士于1969年在荷兰的一群健康鸡群中分离所得，1972年应用该毒株制备的冷冻苗在欧洲数个国家应用，均获得极佳的保护效果[ 1, 2 ]。90年代初期开始，为解决国内HVT冻干苗免疫失败的问题，我国部分地区和鸡场开始应用该苗进行MD的免疫预防，获得较为理想的免疫效果。90年代后期至今，随着进口和国产CVI988/Rispens冷冻苗的在我国大部分地区的普及推广应用，一些地区或鸡场也开始出现了一些零星散发MD的现象。本文就笔者在近3年的时间内对国内应用该苗情况的了解，从疫苗的生产及质量标准、操作使用及养鸡环境等几个方面对出现局部免疫失败的现象作一简单分析如下：
一． 疫苗生产及质量标准
对于疫苗的生产质量问题，最重要的在于对疫苗本身的免疫效力、安全性和外源病原污染等方面的了解。其决定因素应从生产疫苗的毒种是否来源正规、符合标准，以及制苗种毒和疫苗代次的确定是否合理、疫苗效价是否保证等方面进行考虑。
1． 关于制苗种毒的来源：
最初分离的CVI988/Rispens原始毒株为一种低致病力的血清I型MDV，通过在鸭胚和鸡胚成纤维细胞培养物上交替传代致弱后，制备出生产疫苗必需的制苗种毒。荷兰中央兽医研究所（CVI）对该制苗种毒的安全性、免疫原性、外源病原污染等进行全面检测后，才发放到世界各国用于疫苗的生产。目前，欧洲绝大多数国家、日本、以色列、巴西、美国均分别从荷兰引进了共同的制苗种毒用于疫苗产业化生产，满足本国需要及大量出口。在中国，1998年首次由北京市农林科学院畜牧兽医研究所独家从荷兰引进了该制苗种毒并进行了产业化生产CVI988/Rispens冷冻苗。
由于该苗在国内的大量推广及良好应用前景，目前一些单位或个人通过各种途径从其它国家获得该毒种。但如果这些毒种来源不明或检测背景材料不清楚，疫苗的最终生产质量是一个值得考虑的因素，例如这些制苗种毒的代次是否清楚合理、种毒培育传代过程中有无污染其它外源病原（特别是一些免疫抑制性病原等）、种毒的安全性和免疫原性如何评价等。
2． 关于代次的问题：
涉及到代次问题，关键在于各厂家确定的一个既能保证毒株的毒力致弱充分、又能保证疫苗免疫原性的疫苗产品代次，主要应从CVI988/Rispens疫苗的制苗种毒代次和产品代次这两种代次进行了解和考虑。
一般来说，荷兰通过对其制备的制苗种毒进行全面检测后发放到各国的标准制苗种毒均为中等代次，如欧洲各国、日本、美国、中国引进的33～35代。在此基础上，通过生产厂家的进一步细胞传代后，最终制备的疫苗产品的代次还需要经过一系列试验研究才得以确定，一般均为40多代。但如果种毒代次不清楚，细胞传代则会盲目生产，疫苗免疫原性最终难以保证，应用这些疫苗后出现MD发病情况也将不可避免。这种情况在一些制苗种毒背景材料不清楚的厂家或个人生产的疫苗进行免疫接种后容易发生。
另外，有一些国家或厂家引进的CVI988克隆株制苗种毒（如CVI988/c株、CVI988/c/R6株），种毒代次一般在50代左右，最终的疫苗代次可高达65代，这样由于疫苗在细胞传代上过度致弱，免疫原性已大幅下降，保护效果远远不如CVI988/Rispens疫苗[ 3 ]。美国及中国的早期野外应用CVI988疫苗发生的MD免疫失败，与使用该CVI988克隆株有直接的联系。
如果使用较低代次种毒生产的疫苗，是否存在由于种毒或疫苗的代次过低，毒力致弱不充分，通过免 疫鸡群的野外传播而导致病毒毒力返强最终引发MD的可能性，也是值得探讨的一个问题。
3． 关于疫苗的效价：
根据荷兰及国内本研究所的试验资料可以看到，CVI988/Rispens冷冻疫苗的效价（PFU/羽）与疫苗的保护率并不成正比关系[ 1，4 ]。试验研究表明，病毒蚀斑单位含量达到一定程度，保护率不再增加。实验室隔离饲养条件下，100PFU/羽仍可提供SPF鸡一定的保护指数（58.0），500、1000、2000和4000 PFU/羽免疫接种SPF鸡后获得的保护指数（均为79.0）并无显著差异[ 4 ]。考虑到野外早期污染及使用时的各种效价损耗，各厂家在疫苗出厂前均提高数倍以保证最终的疫苗效价在各国标准以上。但接种剂量过大，也会造成免疫麻痹或影响鸡只的生长发育。目前欧洲标准为1000 PFU/羽，美国为1500 PFU/羽，中国为3000 PFU/羽。
考虑到种毒、生产成本及质量标准不同，各国一些厂家或个人生产的疫苗出厂效价过低是造成目前国内MD免疫失败的原因之一。
4． 关于外源病原污染疫苗：
MD疫苗中污染外源病原，特别是一些免疫抑制性疫病病原（如网状内皮组织增生症病毒（REV）、淋巴白血病病毒（ALV）、鸡传染性贫血因子病病毒（CAV）等），除本身导致发病引起肿瘤外，还可以造成免疫抑制，影响CVI988/Rispens疫苗的免疫应答而出现MD免疫失败。日本、美国、澳大利亚、德国、匈牙利等国均相继出现过由于MD疫苗中污染REV造成MD免疫失败的情况。对于CVI988/Rispens冷冻苗质量标准而言，国内近来除要求必须采用SPF鸡胚的生产以外，还明确要求对产品进行REV、ALV、CAV等专项检验，以确保证MD疫苗中无此类病原污染，防止出现由此发生的MD免疫失败。
但目前国内很多鸡场贪图便宜，常使用由一些携带外源病原的商品胚（非SPF鸡胚）制备的新城疫活苗、鸡痘活疫苗、传染性支气管活疫苗等应用于雏鸡，不可避免地带入上述病原，导致这些感染鸡的病原阳性检出率逐年增加，而出现了一些MD免疫失败或出现由REV 或ALV所致的肿瘤发病情况。
二． 疫苗的保存、操作使用
CVI988/Rispens活疫苗是一种细胞结合性病毒，必须在液氮条件下（-196℃）保存、运输。由于有效的疫苗毒存在于活细胞中，活细胞死亡，疫苗中的活病毒也在瞬间死亡。所以在疫苗保存及操作使用过程中，最好地保持细胞的活性，也就最大程度地保持了合格疫苗的出厂效价。
1． 液氮保存问题：
在疫苗保存和运输中，一些厂家或鸡场常购买一些劣质液氮罐来运输和保存疫苗。这些罐特别容易损坏，表现为液氮罐失真空造成液氮挥发加快，由于没有及时发现，部分疫苗暴露在损坏的空罐中时间过长而导致效价降低或完全失效。这些疫苗如果使用，就有可能出现零星散发或普遍发生MD免疫失败的现象，这种情况的鸡群MD现场发病率一般可在30～50%。这对于一些由冻干苗转为液氮苗的新用户，由于缺乏液氮保存及检测经验或鸡场技术员工作责任心不强，发生的可能性更大。
2． 疫苗的操作使用：
操作使用时，由于融化疫苗的水温、稀释液温度、稀释后放置时间、注射等操作不按各厂家要求规范进行，也会造成部分疫苗效价降低或失效，引起现场MD。
对于国产CVI988/Rispens冷冻疫苗，在37～38℃速融后，要求稀释液的温度必须在25～37℃以内使用。如果种鸡场或孵化场在寒冷季节的早上或晚间气温相对较低的时间段内进行操作使用，稀释液温度不按要求提高温度使用，或是沿袭以前使用冻干苗的冰箱冷藏保存方法，这样在使用时，疫苗效价大大降低（如稀释液在15℃以下环境下，疫苗效价下降可达35～55%）。如果再加上随着注射时间的延长，疫苗效价的不断下降，这样现场发生MD的情况则不可避免。
此外，由于国内目前许多鸡场为防止雏鸡的细菌早期感染死亡，在1日龄接种CVI988/Rispens疫苗的同时，常在稀释液中加入抗生素或在较短的时间内在注射疫苗的同一部位又接种一针抗菌药物（如恩诺沙星、庆大霉素、青、链霉素等），这样由于药物对疫苗的直接杀伤作用，疫苗病毒的效价也将有所下降，导致MD免疫失败的发生。所以，在选择可以与MD疫苗同时使用的抗生素药物时，应以疫苗生产厂家的试验数据为准，不可轻信药物生产厂家的宣传。
在注射操作中，也可由于注射剂量不准确（如0.5羽份接种）及漏注疫苗而使雏鸡不能产生应有的免疫效力而散发MD，这种情况在不少鸡场都发生过。因此，在注射疫苗过程中，鸡场负责人或技术人必须检查注射质量，确实保证每只雏鸡都准确无误地接种了0.2ml疫苗。
三．养鸡环境污染严重
众所周知，我国养鸡户普遍的自身饲养管理水平低下，不仅马立克强毒的早期感染严重，还有其他免疫抑制性疾病（如法氏囊、球虫病、鸡白痢、贫血因子病、淋巴白血病等）早期感染，其他药物和应激等也同样干扰马立克疫苗的免疫最终均同样引起MD现场问题。这样的环境和条件下，任何一种好的疫苗都难以发挥其良好的免疫保护效果，现场发生MD、ND、IBD、IB、球虫等都是不可避免的。
随着野外MDV毒力的变异增强，欧洲1996年、美国1999年以后相继发生了CVI988/Rispens疫苗免疫接种的鸡群爆发MD的情况，并且分离出特超强毒MDV（vv+MDV）[ 5 ]。美国自1999年下半年至2000年上半年内分离的野外毒株几乎全部为特超强毒。试验证明，CVI988/Rispens疫苗对这些毒株的保护效果不到70%。对于国内复杂的养鸡环境，特别是一些已经使用了多年CVI988/Rispens疫苗的地区或鸡场，是否也存在由于疫苗免疫压的作用，导致当地MDV毒力演化增强的情况，而导致目前或在最近的将来出现由于特超强毒所致的MD免疫失败的可能？
四． 小结
对于MD的防制，目前最有效的措施仍是选择的质量合格的、安全有效的CVI988/Rispens冷冻疫苗，并加以正确保存及操作使用。考虑到野外MDV毒力的变异增强，以及现有疫苗的效力已经达到极限，在较短时间内很难再找到比CVI988/Rispens疫苗效力更好的疫苗毒株来代替其应用于MD的免疫预防。最终的MD防制应依靠疫苗、建立养鸡环境生物安全体系及鸡的抗病育种等方面的一个系统过程来进行。
