长期以来，鸡球虫病主要依赖药物控制，这导致了各种常用的抗球虫药物几乎都出现了相应的抗药性虫株，利用免疫手段来很好控制鸡球虫病又尚需时日。针对鸡场长期使用单一药物易产生抗药性的弊端，作者研究了两种不同作用方式的药物马杜霉素和地克珠利的联合作用效果，筛选出二者的最佳配合剂量作为复方制剂，进行了复方制剂对单一抗药性虫株的药物效力试验和田间试验。
1 材料与方法
1.1 虫株为柔嫩艾美耳球虫株，包括敏感株、抗地克珠利（RD）、抗克球粉（RC）、抗拉沙里菌素（RL）、抗盐霉素（RS）、抗马杜霉素（RM）株，中国农业大学动物医学院寄生虫教研室保存。
1.2 实验动物 1日龄石歧杂鸡，购于中国农业科学院畜牧研究所；1日龄AA肉鸡，北京华都肉鸡公司，饲育于无球虫环境中至分组。
1.3 药品及试剂0.5％地克珠利(Diclazuril，球佳)：中国农科院上海家畜寄生虫病研究所生产；1％马杜霉素(Maduramicin，抗球王)：灵宝三宝集团；15％拉沙里菌素(Lasalocid，球安)：罗氏药物化学有限公司；12％盐霉素(Salinomycin，赛可喜120)：赫司特公司；25％克球粉(Clopidol，可爱丹)：天河华南兽药厂。各自推荐剂量为l、5、125、60、125mg/kg。胃蛋白酶：Sigma公司
1.4 筛选最佳配合剂量 （1）12日龄鸡随机分10只/组，每组平均体重基本相同。（2）设定12组，马杜霉素(由5 mg/kg至0mg/kg)和地克珠利（由0 mg/kg至1mg/kg）适当配伍成10对药物浓度不同的组合，均匀拌料分别饲喂10组鸡至试验结束，另设一感染不给药对照组（IUC）和一不感染不给药空白组（UUC）。14日龄时，除空白组外，其他组经口感染孢子化敏感株卵囊6万/只鸡。感染后每日观察鸡只精神状态、饮食欲和粪便性状，记录并剖检死亡鸡只。死于球虫病者，病变记分为4分，22日龄时所有鸡称重后，剖检并进行盲肠病变记分，盲肠内收集卵囊并参照甘德培方法纯化。（3）以抗球虫指数（ACI）进行球虫对药物的抗药性或敏感性判断。
1.5 最小有效剂量的测试筛选出的最佳药物组合称为复方制剂。共分8组，依次给予75%的复方制剂等（表1）。14日龄时1～7组感染方式、其他步骤同上。
1.6 与单方制剂的抗球虫效果比较 共分5组，3、4、5为给药组(详见表2)。14日龄时2～5组感染方式、其他步骤同上。
1.7 对抗单药虫株的敏感性试验共分5组（表3），3、5组喂空白饲料，2、4组添加复方制剂，14日龄时按设计感染，感染剂量、其他步骤同上。
1.8 对多种抗药性虫株的作用效果共分18组，1、4、7、10、13、17组给予复方制剂，2、5、8、11、14组给予推荐剂量的马杜霉素、拉沙里菌素、盐霉素、克球粉、地克珠利，其他组不给药。14日龄时感染：1、2、3组RM株，4、5、6组RL株，7、8、9组RS株，10、11、12组RC株，13、14、15组RD株，16、17组敏感株，18组不感染。感染剂量、其他步骤同上。
1.9 田间试验 将地面平养AA肉鸡随机分为2组，第1组1250只为复方制剂试验组，8日龄开始在全价饲料中添加0．05％复方制剂到42日龄止；第2组1245只雏鸡，8～42日龄期间饲喂0．05％抗球王预混剂。2组在相同饲养和防疫条件下进行试验。分别于1、10、20、30日龄和40日龄，从每组鸡舍四角和中央随机各抓10只鸡称重，计算平均重量。试验结束，全群称重，计算饲料报酬。分别于1、10、20、30、40、50日龄和56日龄，从每组鸡舍四角和中央随机采粪便5 g，McMaster\'s法计算克粪便卵囊数(OPG)。试验期间每日观察鸡只，记录鸡只死亡情况，对死亡鸡只及时剖检，判明死因。
2 结果
2.1 筛选最佳配合剂量从10种组合中，选择用药量小而抗球虫效力较佳的一组作为复方制剂配合剂量，以后的试验均采用此配合剂量(试验数据省略)。
2.2 最小有效剂量的测试 复方制剂半量以上ACI均达高效，12.5％～25％达或高于中效；增效作用明显。
2.3 与单方制剂的抗球虫效果比较 复方制剂的抗球虫效果比单一用推荐剂量的马杜霉素或地克珠利都要显著。
2.4 对抗单药虫株的敏感性 复方制剂对RM株、RD株的ACI均超过180。
表1 不同剂量复方制剂对人工感染柔嫩艾美耳球虫的预防效果处理(复方制剂) 存活率（%）平均病变记分 相对卵囊产量(%) 卵囊值相对增重(%) ACI
75%1000 00 110 210
50%1000 00 95.7195.7
25%1000.5 1.5587 177
16.7%1001.2 5.65104187
12.5%1002.148.31096.8 165.8
6.5% 1002.446.81085.7 151.7
感染不给药 1003.7100 4068 91
空白对照 10000 0 100200
表2 复方制剂与单方制剂的抗球虫效果
处理 存活率（%）平均病变记分相对卵囊产量(%)卵囊值 相对增重(%)
ACI
不感染不给药1000 00100 200
感染不给药1003.7 1004079.3102.3
马杜霉素（5 mg/kg）1000.4 0.64 0 95.1191.1
地克珠利（1 mg/kg）1000.1 00 93.5192.5
复方制剂1000 0 0106.3206.3
表3 复方制剂对RM、RD株的抗球虫效果
组别虫株 处理 存活率（%） 平均病变记分相对卵囊产量（%）
卵囊值 相对增重（%） ACI
1RD株 0 1003.6100 40 62.3
76.3
2RD株 复方制剂100 0.2 0099.4 197.4
3RM株01003.4100 40 50.276.2
4RM株 复方制剂1000.30 0 96193
5 不感染010000 0100200
2.5 对多种抗药性虫株的作用效果 复方制剂5 mg/kg马杜霉素对RM株ACI分别为181.6和88.2；复方制剂125mg/kg拉沙里菌素对RL株ACI分别为177.8和125.4；复方制剂60mg/kg盐霉素对RS株ACI分别为198.4和119.2；复方制剂125mg/kg克球粉对RC株ACI分别为227.2和135.0；复方制剂1mg/kg地克珠利对RD株ACI分别为177.1和93.5；复方制剂对敏感株ACI为185.2。
2.6 田间试验结果 1、10日龄和20日龄时两组重量相近，30日龄开始试验组增重明显大于对照组，差异显著（P<0.05）。粪便OPG检查，试验组在1、10、20、30日龄和40日龄均为0；50日龄和56日龄分别为1200和2 300，对照组在20日龄升高到9 500，30日龄达
峰值26 300，后逐渐下降，56日龄时11200。试验组的存活率95.12%，对照组91.57%，提高3.55%；饲料报酬试验组2.1346，对照组2.2295，改善4.26%；平均增重试验组2 650.6 g，对照组2 544.5 g，提高4.17%。
3 讨论
本研究中的马杜霉素属于单价单糖苷类离子载体抗生素，使大量单价阳离子进入细胞内，球虫因细胞膜内外渗透压不平衡导致大量水份进入而肿胀破裂；地克珠利是一种苯乙腈类化合物，它可能影响球虫核酸的合成，允许裂殖体和小配子体的核正常生长与分裂，却阻止其进一步分化，使得裂殖生殖和配子生殖不能正常完成。二者作用的靶阶段也不同，前者主要作用于球虫第一个无性生殖阶段；后者抗球虫活性既可表现在无性生殖阶段，也可表现在有性生殖阶段。地克珠利与离子载体抗生素不存在交叉抗药性在理论上是成立的。
正是通过马杜霉素和地克珠利对球虫的协同作用，复方制剂增效明显。半量以上对敏感株的控制均达高效(表1)；与单药相比，复方制剂的抗球虫效果更好(表2)；对多个抗药性球虫株也有很好的防治效果；田间试验时不仅能很好预防球虫病发生，还能使各项生产指标得到改善。抗药性是对存在于球虫群体中的突变体定向选择的结果，就理论而言，同时对两种或者两种以上药物产生抗药性的突变率要比产生单抗药性的突变率小得多，所以复方制剂对抗单药虫株仍然有效。但此复方制剂能否控制已产生多重抗药性的球虫，还需进一步探讨。