摘 要：通过对某种鸡场雏鸡病原的流行病学调查研究，分离培养并鉴定为绿脓杆菌感染。用动物回归试验、药敏试验、药物治疗和卵黄抗体治疗为临床治疗和防治该疾病提供了一个新的思路。
关键词:绿脓杆菌；雏鸡；鸡卵黄抗体
绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）首次由Gessard于1882年从伤口脓液中分离出来，在自然界中分布广泛，可引起多种动物的脏器脓肿。对动物绿脓杆菌病调查结果表明，绿脓杆菌是鹌鹑化脓性肝炎、水貂出血性肺炎、獐子麝囊化脓、长臂猿化脓性角膜炎等疾病的原发性或并发性病原，绿脓杆菌对牛、羊、兔、大熊猫、鸭等动物的感染有大量报道。绿脓杆菌对鸡属条件性致病性菌，常从正常鸡的肠道、呼吸道和卵中分离出来，能引起各种年龄的鸡发病，致死率1%~90%以上，应激是雏鸡暴发绿脓杆菌的主要原因。吉林省方舟动物医院从长春市某种鸡孵化中心分别向长岭、公主岭等养殖户引种2万只雏鸡，在运输中有零星死亡，到笼后出现大批死亡，死亡率达80%，造成严重经济损失，经军需大学动科学系专家确诊，分离、培养、鉴定病原菌，确证了此次暴发疾病是由绿脓杆菌引起。在此基础上均开展了对疾病的预防治疗，确定卵黄抗体合抗生素治疗方案是行之有效的。
1 材料与方法
1.1病原菌分离鉴定
1.1.1病料涂片染色 取病死雏鸡和处于濒死状态雏鸡的肝脏、肺脏、肾脏和渗出物涂片，革兰氏染色、观察，在各脏器中均能见到革兰氏阴性、中等大小杆菌。以肝脏细菌数为多见。
1.1.2分离培养与观察 无菌剪取鸡肝脏，涂布于SS、普通营养琼脂平板，均生长良好，菌落单一、光滑、扁平或微隆起、湿润、边缘不整齐的中等大小。在SS琼脂上也生长良好，在36 h后，中央出现黑点。在半固体培养基中上层生长旺盛，产生绿色素使培养基变绿，有动力。在普通肉汤中呈均匀混浊，呈黄绿色，有菌膜，能产生黏液，在室温放1~2天能使肉汤变成稠胶体状。
1.1.3生化试验 糖醇类代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、有机酸盐和胺盐利用试验、呼吸酶类试验、毒性酶类试验。
1.2实验动物 7日龄罗曼雏公鸡100只，刚出壳健康雏鸡50只，昆明种小鼠30只，体重18~22 g，均由军需大学实验动物中心提供。
1.3动物回归试验 取所分离细菌在肉汤培养基中生长，稀释细菌浓度为10 000 CFU/ml，分别给小鸡皮下注射0.1 ml、0.15 ml、0.20 ml，24 h鸡全部死亡。鸡死亡后取肝脏,分离培养细菌，用产绿脓素的绿脓杆菌给小鼠注射，同样在24 h 内全部死亡。
1.4药敏试验采用纸片平板扩散法，观察22种不同药物在体外对绿脓杆菌的敏感性。
1.5马立克氏疫苗中的绿脓杆菌检查以适量灭菌蒸馏水现场稀释疫苗，以无菌方法取0.5 ml，涂布于巧克力营养琼脂表面，37 ℃培养48 h，观察有无细菌生长。
1.6马立克氏疫苗安全性试验选取刚出壳健康雏鸡20只，按常规注菌要求注射观察马立克氏疫苗的安全性。
1.7绿脓杆菌抗原内毒素的提取及抗体制备
1.7.1内毒素抗原制备 经形态和生化鉴定后，将绿脓杆菌接种于普通肉汤培养基，37 ℃ 孵育12 h。接种于经胰蛋白酶消化后的大豆培养基，每隔1~2 h振荡一次，37 ℃孵育18 h。取培养物离心（3 000 r/min，离心20 min），超声波破碎处理沉淀，获得内毒素抗原。
1.7.2抗绿脓杆菌的卵黄抗体制备 将获得的内毒素抗原浓缩后，辅以弗氏完全佐剂给健康产蛋母鸡皮下多点注射，10 d后辅以弗氏不完全佐剂皮下注射，10 d后用抗原直接加强免疫，收集鸡卵，将卵黄取出与一定比例的生理盐水混合，用搅拌器打碎，测定血凝效价、中和效价可达1∶64~1∶128。将上述粗制卵黄抗体与烟酸诺氟沙星注射液按一定比例混合，用纱布过滤得均匀液体，即为卵黄抗体注射液。
1.8治疗试验
1.8.1用绿脓杆菌人工感染雏鸡，肌肉注射药敏试验中的敏感药物，配制烟酸诺氟沙星注射液（0.5%）。
1.8.2用绿脓杆菌人工感染雏鸡，肌肉注射卵黄抗体与敏感药物的混合液。各组观察7天。
2 结果
2.1经细菌染色、培养特性、生化试验、结合产色素特点确诊为绿脓杆菌。生化试验结果见表1。表1 绿脓杆菌生化试验结果(略)该菌为需氧菌，但在硝酸盐培养基中可兼性厌氧生长。可氧化分解葡萄糖、木糖和果糖，不分解乳糖、麦芽糖，能够利用十六烷，水解精氨酸2.2动物回归试验结果见 表2(略)。
2.3药敏试验结果见表3(略)。
2.4马立克氏疫苗经培养48 h无细菌生长。马立克氏疫苗给健康小鸡注射未引起发病，证明本批次疫苗合格。
2.5用10 000 CFU/ml菌液给各组雏鸡皮下注射0.1 ml， 6 h后开始给药治疗。 采用肌肉注射给药途径， 注射烟酸诺氟沙星注射液0.1ml、0.15 ml、0.20 ml，卵黄抗体合剂0.1ml、0.15 ml、0.20 ml，结果见表4(略)。
3讨论
3.1本次研究发现雏鸡暴发绿脓杆菌病确与注射马立克氏疫苗和运输过程中应激有关。绿脓杆菌分泌内外两种毒素，外毒素有两种，一种为毒力很强的外毒素A，国内外目前研究结果表明，外毒素A是绿脓杆菌最主要致病因子。另一种是外毒素中的磷脂酶C，是一种溶血毒素，溶血毒素给入侵细菌提供营养，增强绿脓杆菌的毒，此次暴发致死率高、死亡快，与这两种外毒素有直接关系。
3.2多数报道认为，绿脓杆菌对庆大霉素、多黏菌素、磺胺嘧啶和羧苄青霉素敏感。有报道认为， 头孢他丁是抗绿脓杆菌首选药。但从本研究分离出的绿脓杆菌的药敏试验发现，对新霉素和诺氟沙星敏感，而对其它药物则为耐性药物，这可能与绿脓杆菌不同血清型和临床用药不当有关。
3.3 用卵黄抗体合剂抗生素治疗人工感染雏鸡绿脓杆菌，疗效明显高于单用抗菌药物。两组间的保护率进行统计学分析，用t检验比较，具有显著性差异（P<0.01）。这是因为抗生素是在短时间迅速杀灭大量细菌，也易造成内毒素大量释放入血，加剧临床毒血症的发生。卵黄抗体能中和内毒素与抗生素联合应用，治疗效果明显高于单用抗生素，但这类合剂在体内安全性有待进一步深入研究。
